发育过程中染色体的程序化愈合.docVIP

发育过程中染色体的程序化愈合 真核生物中，染色体的愈合是一个程序化过程。实验观察发现，寄生线虫在早期胚胎发育的固定阶段，染色体会经历一个广泛的断裂的过程。如在巨头蛔虫中，单对染色体断裂为40个以上的片段。这些片段在随后的体细胞分裂过程被完整地传递，表明了这些片段是稳定的，断裂的末端添加了端粒发生了愈合。 大多数真核生物体一般不经历此种广泛性的染色体断裂，但对于在基因重组等过程造成的染色体偶然性断裂也有相应的调控机制。麦克林托克在20世纪30年代观察到玉米细胞中断裂的染色体末端失去了“缝合“的倾向，预示了断裂末端已经发生了愈合。 机体内，染色体断裂的末端可重新连接缝合也可发生末端的愈合，发生的方向取决于细胞的类型和末端出现的发育时期。 真核生物的端粒从头合成的分子特征 纤毛原虫 纤毛类原虫拥有两个不同的核型，胚的微核和体细胞的巨核。巨核发育阶段，微核染色体断裂成多个线性分子，端粒被直接添加到断开的染色体末端。染色体愈合现象在此类生物中普遍存在，也因此纤毛原虫被用于研究发育调控的端粒从头合成的分子机制。 巨核发育期间发生的其他类型的重排是去除特定的微核序列。有些消除过程是染色体原先分离的区域相连，消除这些区域之间的DNA序列段（IES）。在位点特异性发育调控的染色体片段化过程中通常也有一段微核DNA被去除，侧翼序列并不欧联一起，而是端粒DNA从头添加到新断开的DNA末端 下毛亚目类纤毛虫 厚游仆虫在巨核发育期间，全长的染色体前体首先被复制，然后出现于内部序列有关的多数缺失-连接过程。然后染色体分裂成大约104个不同的短的线性DNA分子，每一段大约2KB，各携带一个基因。这些分子在两端都获得端粒G4T4重复序列。最后每一个短的线性巨核染色体进行复制，平均每个巨核有103个拷贝 染色体断裂和端粒从头添加的顺式作用信号 下毛亚目中，顺势作用信号标定了巨核发育期间染色体断裂和端粒添加的位点。大多数小腔游仆虫和厚游仆虫巨核染色体端粒，第一个端粒G4T4重复位于TTCAA序列下游17BP处。以TTCAA为核心的共有序列是染色体断裂和端粒从头添加的顺势作用信号 端粒添加的备选位点 伪尖毛虫中某些巨核染色体，端粒形成位点表现出不同的、大范围的变化。新种尖毛虫也有类似的围观不均一性。微核前体序列上端粒添加位点则是重复性或精确性的。 端粒从头添加的酶学 嗜热四膜虫，端粒酶将所有的端粒重复核苷酸序列添加到巨核DNA分子上。下毛亚目也是如此。高度调控的端粒从头添加过程伴随着相应的端粒酶组分的调控。巨核发育期间，在端粒添加发生之前，细胞中端粒酶RNA的稳定水平缓慢上升，以至于在端粒添加期间，端粒酶RNA的稳定水平最高。限速的转录或端粒酶RNP装配，产生足够多的酶用于发育期间 除通常的富含AT的位点，添加并没明显的特殊性。巨核发育期间，从头添加第一个端粒重复序列的核苷酸没有特殊性，端粒的添加对引物3‘末端和RNA模板间的杂交没有明显依赖性。 新生成端粒的长度和序列差异 厚游仆虫的成熟巨核中，大多数端粒DNA维持在一个很短的、均已全长的状态，包括内部28bp的双螺旋（G4T4·C4A4）重复序列和富含G的链的14个核苷酸末端突起，形成一个固定长度的3‘端悬突。巨核发育期间，大多数从头合成的端粒都是过长的84bp双链体，带有不均一的、9~14核苷酸的Ｇ4T4链3’末端悬突。成熟巨核染色体中的端粒长，而且在全长以及富含G链的悬突长度上都是不均一的，但两者的互补C4A4重复序列链末端是严格确定的，是一个5’末端C4 四膜虫的G富含链有端粒酶添加，意味着端粒酶被吸引到新断裂DNA的3’末端，添加序列长度变化很小的重复序列（10~12个重复）。C富含链可能是有引发酶—聚合酶以G4T4重复片段链做模板进行复制的结果。引发酶在G富含链中的定位以及引发酶所催化的从RNA到DNA G4T4重复序列的转换位点，可能取决于结合蛋白见的特异性相互作用、引发酶的序列特异性或者是两种因素综合作用的结果。厚游仆虫中介导此功能的蛋白质是一个51KDa的厚游仆虫端粒结合蛋白，它可与单链G4T4 DNA重复序列特异性结合。最后一个新合成的端粒的亚类含4个G4T4 重复序列，标明这是一个用来包装成端粒-蛋白质复合物的单位长度 厚游仆虫的超长端粒持续15~20小时，然后被修剪成更短的、成熟巨核端粒所特有的均一长度。修剪由一种剪切核酸酶直接作用 全鞭毛纤毛虫 端粒从头添加的酶学 嗜热线毛虫微核染色体有相当数量的内部G4T2重复序列片段，微核端粒含有末端G4T2重复序列，但所有这些在巨核发育期间都被消除，新的端粒DNA是从头添加的 嗜热四膜虫在基因重组中断裂的DNA末端添加的第一个端粒重复序列几乎总是喊一个全场的G4片段，端粒酶负责将第一个端粒重复序列从头添加到非端粒末端，从而使末端愈合 四膜虫端粒从头