第5章 基因工程基本流程-筛选与鉴定.pptVIP

选择过程 从转化后的菌体克隆中分离质粒，电泳、比较其分子量。 分子量 Marker 载体 重组 克隆 * 7. 限制性酶切图谱法 限制性酶切图谱：核酸经限制性内切酶消化成片段，用电泳方法分离，不同的核酸形成的各自独特的条带图谱。 * 在外源片段大小及限制性酶切图谱已知的条件下，选择一两种内切酶切割载体，电泳后比较电泳结果(DNA条带数目和分子大小）差异进行区分。 或用合适的内切酶切下插入片断，再用其它酶切这个片断，电泳后比较结果是否符合预计的结果。 原理： * A B A或B * 不同克隆的酶切结果 * 选择过程 * 8. DNA序列测定 原理： 通过对插入片段序列的测定确定是否是所需的重组子 * 选择过程 双脱氧末端终止法 化学降解法 焦磷酸降解法 高通量Solexa测序 …… * * 基于外源基因表达产物的筛选与鉴定 1. 蛋白质功能检测 原理： 外源基因编码具有特殊功能的酶或活性蛋白，根据抗原抗体反应原理，针对该表达产物设计相应的检测方案 针对表达载体的检测方法 * 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 125I 标记的二 抗结合蛋白 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 125I标记的二抗 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 固相支持滤膜 固相支持滤膜 待测基因 产物蛋白 一抗 二抗 125I 标记的二抗 结合蛋白 125I标记的二抗 *