第十章转化与筛选重点分析.ppt

第一节??????? 重组DNA向宿主细胞的导入 第二节??????? 转化子的筛选与鉴定 第三节??????? 目的基因序列测定 第一节??????? 重组DNA向宿主细胞的导入 一、转化 二、通过接合作用传递质粒DNA 三、通过转染/转导作用传递遗传物质 一、转化 : 以质粒作为克隆载体将目的基因导入宿主细胞 1928年, 美国的Oswald, Avery 首次开展了肺炎球菌的转化试验 感受态细菌是指细菌处于容易接受外源DNA的状态。有的细菌在生长周期任何时候自动产生如枯草、嗜血杆菌。有的在对数生长期发生，如E.coli。产生机制不明。一是原生质体假说，另一是酶受体假说。 转化作用就是一种基因型细胞（感受态细菌）从周围介质中吸收来自另一种基因型细胞的DNA, 进而使原来细胞的遗传基因和遗传性发生相应变化的现象。常见转化方法有㈠ 原生质体转化法； ㈡ 化学转化法； ㈢电穿孔法。 ㈠ 原生质体转化法:除去细胞壁后加外源DNA，经吸收恢复再生培养，如枯草杆菌。 ㈡ 化学转化法: 1970年Mandel和Higa首先用CaCl2经短暂的热休克后，可使外源DNA转入E.coli。 1.原理：将对数生长期的细菌在0℃下, 用预冷的CaCl2溶液低渗处理, 以使菌体的细胞壁和细胞膜通透性增加, 菌体膨胀成球形。DNA易于进入细菌的细胞内