实验十聚丙烯酰胺凝胶电泳分离生物大分子.docVIP

实验十 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离生物大分子 Ⅰ 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白 【目的和要求】 通过本实验学习垂直板电泳技术——聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作。 【基本原理】 聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylaminde gel electrophoresis， PAGE）可分为连续的和不连续的两类，前者指整个电泳系统中所用缓冲 液，pH值和凝胶网孔都是相同的，后者是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓 冲液，pH值和孔径，不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨能力。如果在聚丙烯酰胺胶不连续系统，碱性缓冲体系中，分离血清蛋白质，由于具有浓缩、电荷、分子筛三种效应，所以分离效果好，分辨率高，血清用纸电泳只能分出5～7个成分，用聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳可分出30多个条带清晰的成分。 【】 方法a： 凝胶模子由3部分组成：一个压制成“ㄩ ”形的硅橡胶带；两块长短不等玻璃板；样品槽模板。胶带的内侧有两条凹槽，可将两块相应大小的玻璃板嵌入槽内。玻璃板之间形成一个0.5～2mm厚的间隙，待制胶时，将玻璃板洗净、晾干、嵌入胶带凹槽中。将长玻璃板下沿与胶带框底之间保持1～2㎜距离，使此端的凝胶与一侧的电极槽相通，而短玻璃板的下测则插入橡胶框的底槽内，由此便形成一个“夹心”凝胶腔。把上述好的凝胶腔置于电泳槽内，用长螺丝将两个半槽固定在一起。