培训课件--第六章 :基因工程病毒疫苗.pptVIP

培训课件--第六章 :基因工程病毒疫苗.ppt

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* * * * This slide is a representation of traditional whole virus vaccine approaches. * * This series of slides is used to make a distinction between traditional vaccine approaches and those that use recombinant DNA technology for producing vaccine antigens and gene delivery vehicles. * * * * * * The major point to make on this slide is that vaccines made with recombinant DNA technology do not use whole virus in the manufacturing process. The genes used to express the antigenic structure of interest are modified and resynthesized in the final product, so it is not possible for any of the vaccines being test to cause HIV infection. The other major point to make is about the value of in vivo antigen production referring back to the concepts illustrated in slides 2, 3, and 4, and indicating that when the vaccine antigen is made inside the cell, there is a much more potent induction of the CD8+ T cell response, thought to be associated with control of HIV infection. * * * * 2、亚单位疫苗设计策略 (1)抗原选择 能模拟诱生有效保护性抗体应答的抗原决定簇 具有优势免疫的抗原决定簇 对人体安全 特异性 (2)表达载体及表达系统(按需要选择) 3、基因工程载体疫苗的设计策略 (1)抗原选择: 同上 (2)疫苗载体的选择 选择非致病性细菌或病毒作疫苗载体。 A:理想疫苗载体的条件: 感染靶细胞 诱导机体产生免疫反应 无毒力返祖:在不断繁殖过程中出现自身修复(毒力回复) 无大量排毒引起的环境污染 生活史中不能与宿主染色体整合 操作方便 接种后不会长期在体外存留 B常见的疫苗载体 痘苗病毒载体 流感病毒载体 Mengo 病毒载体 金丝雀痘病毒载体 仙苔病毒载体 疱疹病毒载体 沙门菌 卡介苗 病毒载体 细菌载体 4、基因缺失活疫苗的设计 关键:选择要删除的靶基因,一般为复制非必需、毒力相关的基因 5、核酸疫苗的设计策略 基因选择:主要保护性抗原基因 分子佐剂:增强核酸疫苗激发免疫应答反应的细胞因子 表达载体:表达抗原能力强的载体(启动子、增强子、polyA信号 二、基因工程疫苗制备的技术路线 1、基因工程亚单位疫苗制备的技术路线 抗原基因选择与分离 构建重组载体 转化宿主(细胞) 表达、纯化 2、基因工程载体疫苗制备技术路线 抗原基因选择与分离 插入疫苗载体系统(细菌或病毒) 重组载体体外培养 收获培养物及后处理 3、基因缺失活疫苗制备技术路线 选择靶基因 定向缺失靶基因 基因缺失毒株的培养 收获病毒及后处理 4、核酸疫苗制备技术路线 目的抗原基因的选择与分离 构建表达质粒 转入宿主细胞扩增 纯化重组质粒 后处理 三、基因工程病毒疫苗的质量控制 (1)注意:抗原基因、表达载体的变异和稳定性 安全要求:重组后的基因产物无致病性、无毒性、无潜在危险 有效性要求:保证表达后的蛋白具有良好的抗原性和免疫原性 稳定性和重复性要求:同样的方法可以重复生产和制造 (2)研制阶段的要求: 插入基因:所有的背景清楚、克隆过程清楚 载体:背景(启动子、复制子、抗药性等)清楚 宿主细胞:背景(来源、表型、遗传型及相应的标记基因)清楚 第四节 基因工程病毒疫苗的研发现状 一、需研制的基因工程病毒疫苗 艾滋病 乙型肝炎 丙型肝炎 戊型肝炎 EBV肝炎 人乳头瘤病毒(宫颈癌) 单纯疱疹病毒 巨细胞病毒 呼吸道合胞病毒 轮状病毒 登革热病毒 埃博拉病毒 二、重要病毒性疾病基因工程疫苗的研究进展 1、艾滋

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