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* 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基的设计与优化 设计一种以花生壳、玉米芯和豆粕为原料的枯草芽孢杆菌发酵 培养基并通过正交优化实验对该发酵培养基进行优化。结果表明 在培养基中豆粕液浓度为30g/L花生壳浓度为10 g/L玉米芯浓度为 2 g/L接种量为5的情况下采用此种配比的发酵培养基37℃ 过夜培养菌体的生长量达到最大所测OD600值可达到1.122。 一种枯草芽孢杆菌发酵培养基的设计与优化 设计一种以花生壳、玉米芯和豆粕为原料的枯草芽孢杆菌发酵培养基并通过正交 优化实验对该发酵培养基进行优化。结果表明在培养基中豆粕液浓度为30g/L花生壳浓度为10 g/L玉米芯浓度为2 g/L接种量为5的情况下采用此种配比的发酵培养基37℃过夜培养菌体的生长量达到最大所测OD600值可达到1.122。王佳 介绍: 我国是一个农业大国花生、玉米、大豆都是比较重要的农作物产量极大。 我国对于这三种原材料的利用与开发正在逐步的发展中相对来说还有很大的 空间充分的发掘它们的用途具有很大的意义。 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtitles是饲用微生态制剂的常用菌种之一芽孢杆菌在成熟期以孢 子状态存在具有天然耐酸和耐胆盐等优点。枯草芽孢杆菌通过定植到目标动物肠道中经 生物氧作用颉颃致病微生物并产生多种消化酶及多种营养物质产生有益代谢产物不仅改 善原料的风味更重要的是它可调节消化道健康增强动物体的免疫功能最终预防疾病的发 生达到促进目标动物生长和提高饲料转化率的目的。对促进营养消化吸收、提高饲料转 化率、防病和促进生长起重要作用因而被研制成饲用微生态制剂。碳源和氮源是微生物 细胞和代谢产物的重要营养物质也是发酵培养基的重要组成部分。发酵培养基配方是影 响微生物发酵的重要因素之一。 1 材料 1.1菌株 枯草芽孢杆菌 1.2仪器 电子分析天平 低温冰箱 不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器 超净工作台 紫外可见分光光度计 恒温振荡器 生化培养箱 移液枪 规格1ml-200μl 1.3试剂 1.3.1 实验材料 花生壳、玉米芯、豆粕 然后将花生壳和玉米芯烘干后粉碎用40目筛子筛选得较小颗粒原料。 1.3.2 种子培养基 葡萄糖 20g 蛋白胨 15g 氯化钠 5g 牛肉膏 0.5g 琼脂 20g 加蒸馏水至1L溶解用NaoH 将pH值调至6.8-7.0。 1.3.3基础发酵培养基 葡萄糖 20g 蛋白胨 15g 氯化钠 5g 牛肉膏 0.5g 加蒸馏水至 1L溶解用NaoH将pH值调至6.8-7.0。 2方法 2.1 枯草芽孢杆菌种子液的制备 1配制好种子培养基 121℃高压蒸汽灭菌20min待温度降低后倒平板。恒温培养箱培养24h后观察 是否有杂菌污染若未污染则将枯草芽孢杆菌从保存的斜面转接于新鲜种子培养基。 于37℃恒温培养16h。置4℃冰箱保存备用。 2配制好基础发酵培养基 灭菌后取培养好的菌种接种于盛有 100ml无菌种子培养基的500ml 三角锥形瓶 中置摇床 37 ℃振荡培养过夜转速为120 r/min。置4℃冰箱保存备用。 2.2碳源单因素实验 分别以花生壳、玉米芯做为碳源进行枯草芽孢杆菌的单因素实验。 以基础发酵培养基为对照将其中的碳源葡萄糖分别用不同量的花生壳和玉米芯替换 (如表1所示)按5%的接种量将种子液接入盛有20ml培养基的100ml三角锥形瓶中于 37℃转速为120 r/min的摇床培养过夜。测定其菌体的生长量。进行3次重复实验结果 为3次重复实验的平均值。 2.3氮源单因素实验 用豆粕作为氮源进行枯草芽孢杆菌的单因素实验。 同样用基础发酵培养基做对照将其中的氮源蛋白胨用不同量的豆粕替换（见表1）其 他操作同上碳源的单因素实验。进行3次重复实验试验结果为3次试验的平均值。 2.4 正交优化实验设计 试验选择花生壳玉米芯作碳源豆粕作氮源按正交设计表L9（3^4）安排试验7-9 (见表2) 发酵条件温度37℃初始 pH 7.0120 r/min 振荡培养100 ml摇瓶装液量 20ml。pH 6.8~7.0 121℃灭菌20 min（10-12）。重复 3 次试验试验结果为 3 次重复试验的平均值。 2.5 菌体浓度测定 本实验采用紫外吸光光度法测定取适量培养液以对应未接种的培养基作为空白调零 测定各培养基经培养后在波长600nm处的吸光值。未接种的培养基需与接种的培养基 保持一致的环境条件即相同培养条件下培养相同的时间。 3 结果 3.1花生壳玉米芯（碳源）对菌体生长量的影响 以15g/L蛋