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中药养生方剂水提取物抗氧化能力测定 　　摘要：试验采用罗丹明B作显色剂测定了古代养生方剂中常见的红枣、当归、黄芩、五味子等4种中药水提取物的抗氧化能力。结果表明，这些中药水提取物对·OH都具有较强的清除作用，呈量效关系，其中红枣的清除能力最强。据此评价其水提取物的抗氧化能力大小顺序为：红枣当归黄芩五味子。 　　关键词：中药养生方剂；水提取物；·OH；抗氧化能力 　　中图分类号：TQ461 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4484-02 　　在中国古代，人们都很重视养生，出现了很多养生中药方剂。这些方剂可以调节人体机体状态，增进健康，延缓衰老。中医认为，人体健康长寿很重要的条件是先天禀赋强盛，后天营养充足。脾胃为后天之本，气血生化之源，机体生命活动需要的营养，都要靠脾胃供给[1]。正因为如此，众多的养生方剂中护脾养胃类的中药使用较多，本研究采用分光光度法测定了常见的4种护脾养胃中药养生方剂水提取物对羟基自由基的清除能力，据此评价其抗氧化能力，操作简便，测定快速。 　　1 材料与方法 　　1.1 仪器与试剂 　　仪器：TU-1800PC型紫外-可见分光光度计（北京普析公司）；PXS-270型精密离子计（上海精密仪器公司）；HH-1型恒温水浴锅（上海比朗仪器公司）。 　　试剂：H2O2（分析纯）；罗丹明B（分析纯）；FeSO4·7H2O（分析纯）；邻苯二甲酸氢钾（分析纯）；盐酸（分析纯）；去离子水。 　　样品：红枣、当归、黄芩、五味子均购于中药房。 　　1.2 试验方法 　　样品抗氧化能力的测定以H2O2和FeSO2·7H2O体系产生的·OH为检测对象，通过在554 nm处检测捕获剂罗丹明B的吸光度进行评价。由于·OH氧化能力强，可以快速地使罗丹明B标准溶液吸光度降低为A0，通过试验证明其降低的程度与·OH的含量有一定量效关系，因此可以通过这种降低程度实现对·OH的测定。中药的水提取物可以有效清除体系产生的·OH，加入这些水提取物于罗丹明B体系中，使体系溶液吸光度下降的程度降低，其吸光度为AS，罗丹明B标准溶液吸光度为A，则清除率D按以下公式计算： 　　D=（AS-A0）/（A-A0）×100%[2] 　　从清除率的计算结果大小即可评价其抗氧化能力。 　　1.3 ·OH生成量的测定 　　准确移取罗丹明B标准溶液7.00 mL（2×10-4 mol/L）和邻苯二甲酸氢钾-HCl溶液10.0 mL（pH 2.5）2份于两支50 mL容量瓶中，向其中一容量瓶再加入FeSO4标准溶液5.0 mL（5×10-3 mol/L）和H2O2标准溶液5.0 mL（2×10-2 mol/L），另一容量瓶不加，以去离子水定容至50 mL，静置5 min待反应充分后，在554 nm处分别测定这两种溶液的吸光度A0和A，间接测定体系中的·OH。 　　1.4 样品的测定 　　1.4.1 样品的提取 取4种中药样品若干，经过烘干粉碎后，分别准确称取1.00 g于4个锥形瓶中，各加去离子水100 mL，用文火煮沸40 min后，趁热过滤，滤液转移至250 mL容量瓶中，并将滤渣用热水冲洗3次，与滤液合并，待溶液冷却后以去离子水定容[3]。 　　1.4.2 样品测定 将提取好的样品溶液进行适当稀释测定即：红枣（0.10 g/L）、当归（0.20 g/L）、黄芩（0.40 g/L）、五味子（0.40 g/L）。在测定·OH生成量体系中分别加入稀释后的样品溶液各0.20、0.50 、1.00、2.00 mL，在554 nm处测定其吸光度。 　　2 结果与分析 　　2.1 最佳检测波长的确定 　　分别测定罗丹明B溶液和罗丹明B-Fe2+-2H2O2体系溶液的紫外可见吸收光谱图，结果发现两个光谱图的最大吸收波长均出现在554 nm处，而且罗丹明B-Fe2+-2H2O2体系的谱图中的吸光度比罗丹明B溶液体系小，说明由Fe2+和H2O2作用产生的·OH与罗丹明B发生氧化反应，导致吸光度下降，因此在554 nm处即可对·OH进行测定。 　　2.2 酸度的选择 　　用配制好的缓冲溶液调节罗丹明B-Fe2+-2H2O2体系的pH分别为2.0、2.5、3.0、4.0、5.0。 　　测定在不同pH环境下体系的ΔA，结果发现在pH=2.5时ΔA值最大，确定试验在pH 2.5条件下进行效果最佳。 　　2.3 FeSO4加入量的选择 　　在其他测定条件不变情况下分别加入1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL的FeSO4标准溶液（5×10-3 mol/L），随着体积的增加，体系ΔA值也不断增大，但加入FeSO4体积达到5.0 mL时，ΔA的值趋于稳定。故本试验中FeSO4溶液最佳用量为5.0 mL。 　　2.