电喷雾萃取电离质谱直接检测人体呼出气体中的乙腈.docVIP

电喷雾萃取电离质谱直接检测人体呼出气体中的乙腈 　　摘要人体呼出气体携带大量的生理病理信息，在临床诊断和代谢组学研究中发挥着日益重要的作用。本研究在未对样品进行预处理条件下，采用电喷雾萃取电离质谱（EEIM）技术直接测定呼出气体中乙腈分子。在优化的实验条件下，结合多级串联质谱，有效地获得了人体呼出气体中乙腈含量的信息。对气相乙腈的检出限为71pLL，线性范围为76～191pLL。以两名健康志愿者呼出气体为实例，实际检测了其中乙腈的含量分别为19和1pLL，相对标准偏差（R）分别为6%和72%。结果表明，本方法灵敏度高、精密度好、分析速度快、特异性强，能够承受呼出气体中复杂基体的影响，适合于呼出气体中痕量乙腈的直接半定量检测，也可为呼出气体中其它小分子物质的检测提供新思路。 　　关键词电喷雾萃取电离质谱；乙腈；呼出气体 　　1引言 　　近年来，呼出气体检测凭借其无损、快速、取样方便等优势，及其中的生物标记物分子与疾病（如肺癌、新陈代谢、脏器状况的相关性，逐渐成为现代临床医学、分析检测领域研究的热点。有研究表明，乙腈可作为吸烟的标志物，随着吸烟数量的增加，吸烟者呼出气体中乙腈的含量迅速升高，即使是被动吸烟者，其呼出的乙腈含量也明显高于正常对照组]。据报道，乙腈还与吸毒成瘾、膀胱癌等有一定关系。因此，建立一种实时在线、灵敏、快速、准确的呼出气体中乙腈的检测方法，对乙腈在人体中的代谢及其在人体生理病理中所产生的作用的研究具有重要意义。 　　乙腈分子检测的常规方法有气相色谱法（G）和气相色谱质谱法（GM）。但因灵敏度低，G及GM法很难对呼出气体中乙腈进行直接快速原位检测。选择离子流动管质谱法（electionflowtubemassspectrometryIM）和质子转移反应质谱法（ProtontransferreactionmassspectrometryPRM）已用于呼出气体中乙腈的检测。但IM法需对呼出气体进行收集和预处理，且灵敏度不高，难以实现乙腈的实时在线分析；而PRM法虽可进行呼吸气体在线分析，但由于乙腈分子较难质子化，对仪器的要求更高。加之，呼出气体基体成分复杂（含氮、氧、水、挥发性非挥发性有机化合物等），受环境的影响较大，检测结果的准确性受到了一定限制。EEIM是一种适合于复杂基体样品分析的新兴离子化技术，它能将中性样品和带电试剂离子分开，并在线完成样品的萃取和电离，适宜于对样品进行活体、直接、实时检测。本研究利用其具有可调三维空间、方便更换萃取试剂及保证人身安全等优点，以硝酸银为萃取溶剂，在无需样品预处理条件下直接对呼出气体中乙腈进行快速质谱定性及半定量分析。 　　2实验部分 　　21仪器与试剂 　　EEI离子源：东华理工大学研制。LQXL增强型线性离子阱质谱仪（美国innigan公司），配有Xcalibur数据系统。KQ2型超声清洗仪（昆山超声仪器有限公司）；精密电子天平（Mettleroledo公司）。甲醇（色谱纯，Khemicals公司）；AgNO（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；乙腈（色谱纯，ikmaechnologies公司），水为实验室自制超纯水。用水配制1mgL乙腈标准储备液。用甲醇配制1mgLAgNO溶液，作为喷雾萃取溶剂。呼出气体样品来自健康志愿者。 　　22实验方法 　　以超纯水梯度稀释乙腈标准储备液至，1，2，，1和2nLL各2mL，分别置于mL干净、干燥的锥形瓶中。用带有两支特氟龙通气管（内径2mm外径mm）的橡皮塞密封住盛有标准溶液的锥形瓶，其中一支通入乙腈溶液液面下2cm，该气管上端连接一个控制阀，以控制惰性气体（N2）的流速；另一支则位于液面上方，将液面上的空气（含乙腈分子）通过转子流量计引入EEI离子源，流速为8Lmin。乙腈分子与来自EEI另一通道的试剂Ag+碰撞，形成+离子，进入质谱被检测。 　　采用气液转换公式计算引入EEI离子源的乙腈浓度： 　　2实验条件 　　实验采用正离子检测模式，质量范围～a；雾化气（N2）压力为1MPa；质谱离子传输管温度为℃；喷雾电压为kV； 　　ollisioninduceddissociationI能量分别为1%和16%，碰撞持续时间分别为和6ms。其它实验参数由系统自动优化。需要注意的是，因实验采用1mgLAgNO甲醇溶液，为防止Ag+对仪器的污染和损伤，喷雾溶剂通道与水平面夹角为9°，溶剂喷雾口与质谱口距离为cm；为保证样品分子最大限度与试剂离子进行碰撞并发生反应，两喷雾通道夹角保持12°，样品喷雾口与质谱入口距离为cm，如图1所示；进行样品检测时，为防止呼出气体中待测物分子冷凝于样品通道管壁上，采用加热恒温装置，使样品传输管温度保持在8℃。 　　结果与讨论 　　1乙腈标准品的EEIM分析 　　一级谱图中还有丰度为