电致化学发光分子印迹传感器测定L苯丙氨酸.docVIP

电致化学发光分子印迹传感器测定L苯丙氨酸 　　1引言 　　L苯丙氨酸（Phe）是人体8种必需氨基酸之一，在多种疾病的诊断治疗和病理学研究上具有重要意义[1-3]。目前测定Phe的方法有高效液相色谱法[4]、气相色谱质谱法[5]、电化学法[6]等，但这些方法存在灵敏度不高、选择性不好、仪器昂贵等问题。 　　电致化学发光法（ECL）因其灵敏度高、仪器简单、检测快速等优点，已被应用于氨基酸的检测[7，8]。三联吡啶钌（Ru（bpy）2+3）是目前应用最广泛的发光试剂。由于Ru（bpy）2+3参与化学反应前后的形态和性质基本保持不变，将其固定到电极上反复使用，不仅节约了试剂，有效降低了检测成本，还简化了实验装置[9-11]。 　　分子印迹聚合物（MIP）对目标分子具有良好的特异性识别的能力，已被广泛应用于化学、生物等诸多研究领域。溶胶凝胶法制得的印迹传感器具有物化性质稳定，检测快速且操作简便等优点[12]。已有文献报道用该印迹传感器测定血浆样品中的L苯丙氨酸，检出限为1.0 ×10 　　Symbolm@@ 9 mol/L[13]。 　　将电致化学发光和分子印迹技术相结合，既可解决电致化学发光法的选择性问题，又可有效提高分子印迹传感器的检测灵敏度[14-16]。本研究在Ru（bpy）2+3固相电极上电沉积溶胶凝胶分子印迹膜，制备了一种对Phe的测定兼有高灵敏度和良好选择性优点的传感器。此传感器可应用于尿样中Phe的快速检测。 　　2实验部分 　　2.1仪器与试剂 　　3结果与讨论 　　3.1ECL电极制备条件的优化 　　3.1.1ECL电极的电化学和ECL性能碳纳米管由于其优良的电学性能已被应用于Ru（bpy）2+3的固定化研究[17]。图1A是Nafion电极（a）和 ECL电极（b）在含有1.0 ×10 　　Symbolm@@ 5 mol/L Phe的PBS溶液中的循环伏安曲线。曲线b的峰电流明显大于曲线a，说明MWCNTs的引入提高了电极表面的电子传输速率。图1B给出了两种电极的发光强度。ECL电极的发光强度是Nafion电极的9倍，表明MWCNTs能显著提高方法的灵敏度。 　　本研究采用烷氧基硅烷作为印迹材料。图3为电沉积溶胶凝胶印迹膜的循环伏安图。随着扫描圈数的增加，电极的响应电流降低直至稳定，说明ECL电极表面已完全被印迹膜所覆盖。扫描圈数影响分子印迹膜的厚度。扫描圈数越多，膜越厚，而膜太厚不利于模板分子的洗脱，所以本实验选择扫描圈数为25。 　　采用扫描电子显微镜观察了不同修饰电极的表面形貌。图4A为ECL电极的SEM图，MWCNTs外径约为20-40 nm，分布均匀，并镶嵌于Nafion膜里及其表面。图4B为ECLMIP电极的SEM图，MWCNTs外径约为35-65 nm，粗略算得印迹膜的厚度为15-25 nm。 　　3.3模板分子的洗脱 　　模板分子通过非共价键与功能单体、交联剂结合形成印迹聚合物。这种结合方法的洗脱较温和。试验了热水，无水乙醇，0.01 mol/L NaOH溶液和44% 甲酸洗脱模板分子Phe。结果表明，热水洗脱Phe的过程很缓慢；无水乙醇会溶解分子印迹膜；0.01 mol/L NaOH溶液也会破坏分子印迹膜的完整性，而44%甲酸能快速洗脱模板分子。但由于甲酸浓度太高，易使膜整体脱落。所以本实验选用44% 甲酸和水交替浸泡电极。随着洗脱时间的增加，ECL值逐渐减小，4 h后发光值已接近基线，说明模板分子已洗脱完全。 　　3.4ECLMIP传感器的电化学性能 　　图5为不同电极在K3[Fe（CN）6]溶液中的循环伏安曲线。模板分子洗脱前，电极在溶液中几乎不导电（曲线a），说明电极表面被致密的印迹膜所覆盖。随着洗脱过程的进行，K3[Fe（CN）6] 的峰电流逐渐增大，直至不再变化，此时模板分子已洗脱完全（曲线b）。对比曲线b和c可知，ECLMIP电极的导电能力不及ECL电极。K3[Fe（CN）6]可自由通过分子印迹膜中的孔穴，但大部分电极仍被不导电的分子印迹膜所覆盖，致使K3[Fe（CN）6] 对ECLMIP电极的电化学响应降低。 　　[TS（][HT5”SS]图5不同电极在5 mmol/L K3[Fe（CN）6]中的循环伏安图 （a） ECLPhe MIP电极，（b） ECLMIP电极，（c） ECL电极， 扫速：100 mV/s 　　Fig.5CVs of different electrodes in 5 mmol/L K3[Fe（CN）6] （a） ECLLphenylalanine （Phe）MIP electrode； （b） ECLMIP electrode； （c） ECL electrode scan rate： 100 mV/s.[HT5][TS）