疟原虫分子诊断和基因检测溯源的原理、意义以及全球基金疟疾项目镜检的质量控制1讲解.ppt

疟原虫分子诊断和基因检测溯源的原理、意义以及全球基金疟疾项目镜检的质量控制 广西壮族自治区疾病预防控制中心 寄生虫病防制所 一、背景、任务和目的 1、《广西壮族自治区消除疟疾实施方案》（2010-2020年） 2、中国全球基金疟疾项目（2010.7.1-2015.6.30） 病例核实（省级CDC任务部分）： 1、网报所有疟疾病例进行分子诊断核实（基因分析？） 2、疑似疟疾病例（定义）进行分子诊断核实 病例溯源（省级CDC任务部分）： 方式：个案调查，基因溯源 二、疟原虫分子诊断简介 检测目标基因：Plasmodium ssrRNA基因 方法：巢式PCR 疟原虫PCR检测引物 引物名称 序列 特异性 Tm (℃) 产物大小 (bp) rPLU5 5’-CCTGTTGTTGCCTTAAACTTC-3’ Plasmodium sp. 56.06 1100 rPLU6 5’-TTAAAATTGTTGCAGTTAAAACG-3’ 51.26 rFAL1 5’-TTAAACTGGTTTGGGAAAACCAAATATATT-3’ P. f 56.57 205 rFAL2 5’-ACACAATGAACTCAATCATGACTACCCGTC-3’ 63.40 rVIV1 5’-CGCTTCTAGCTTAATCCACATAACTGATAC-3’ P. v 62.03 120 rVIV2 5’-ACTTCCAAGCCGAAGCAAAGAAAGTCCTTA-3’ 63.40 rOVA1 5’-ATCTCTTTTGCTATTTTTTAGTATTGGAGA-3’ P. o 56.57 800 rOVA2 5’-GGAAAAGGACACATTAATTGTATCCTAGTG-3’ 60.67 rMAL1 5’-ATAACATAGTTGTACGTTAAGAATAACCGC-3’ P. m 59.30 144 rMAL2 5’-AAAATTCCCATGCATAAAAAATTATACAAA-3’ 53.83 Pmk8 5’-GTTAGCGAGAGCCACAAAAAAGCGAAT-3’ P. knowlesi 62.00 153 Pmkr9 5’-ACTCAAAGTAACAAAATCTTCCGTA-3’ 55.42 三、疟原虫基因溯源简介 原理和方法：微卫星DNA（SSR）与SSR检测技术；高度多态性、个体特异性； PCR（间日疟），半巢式PCR（恶性疟） 工作程序： 建立本地疟原虫SSR数据库。 四、工作平台与工作要求： 工作平台：省级疟疾检测参比实验室（包括镜检和分子生物学）；市、县、乡疟疾监测网络。 工作要求：疟疾病例以及疑似疟疾病例（定义）要求进行详细的、可靠的病例个案调查，血片（至少2片），干燥的滤纸血样（至少2份）。 五、关于镜检的质量控制 方法：现场督导、批量测试、随机抽样（血片复核）和盲法复检； 要求：完善镜检实验室网络，建立镜检数据库； 相关记录和表格： 《疟疾病例个案调查表》 《发热病人疟原虫血片镜检登记表》（表18） 《疟原虫血片镜检复核统计表》（表20） 《疟原虫镜检督导表》（表37） 《血片镜检质量控制督导统计表》（表19） 等。 Thanks! * * *