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茶和咖啡对吸烟引起的小鼠自由基损伤的保护作用 前言 传统观念认为吸烟对人体的损害来自 HYPERLINK /view/266897.htm 烟碱，然而，最新研究表明，吸烟中自由基的危害要远远大于烟碱。香烟固相中的自由基可以通过滤嘴将其部分除去。另一部分则包含在烟气的气相中，每吸入一口烟气，其中自由基的含量就达106个，过滤嘴对此类自由基的清除作用不大，必须采取更科技的手段来对其进行清除和降低。虽然这些自由基的存活时间仅仅为10秒，但却有着极大的危害性，它的危害主要表现在破坏细胞膜、使血清抗蛋白酶失去活性、损伤基因导致细胞变异的出现和累积等方面，进而引起一系列疾病。吸烟作为目前产生自由基最快最多的方式，其对健康的损害作用已经引起了人们的广泛关注。 咖啡和茶是世界上消费最多的饮料，目前已经有很多关于喝茶和喝咖啡有利于健康和抗氧化性的报道。研究表明，茶叶中的茶多酚和咖啡中的绿原酸等物质均具有较强的抗氧化和清除自由基的能力。 吸烟在现代生活中普遍存在，通过研究吸烟引起的自由基积累和健康的损伤作用以及茶和咖啡这两种常见饮品的抗氧化和自由基清除作用，对倡导健康的生活方式，有效预防和减少吸烟带来的危害具有重要意义。 实验材料 动物：健康雄性KM小鼠60只，体重18~22g 试剂药品：绿茶（碧螺春，产自江苏）、雀巢咖啡（速溶， 袋装， 浅棕色颗粒， 轻度烘培）、 丙二醛（MDA）测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、超氧化物歧化酶（SOD）测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)、生理盐水、香烟 仪器设备：光栅分光光度计、台式离心机、可调恒温水浴箱（可调至100℃）、微量移液器 （10-100ul，100-1000ul）、电子天平、灌胃器、鼠笼、烟熏装置（自已设计制作） 观察指标 小鼠血浆、肝、肾组织SOD、MDA活性 小鼠红细胞渗透脆性，开始溶血和完全溶血时的Nacl浓度 实验方法 样品制备：将绿茶按20%的添加剂量加入95~100℃ 水中浸泡7min，倒出茶汤，再加入等量沸水7min，合并两次茶汤；速溶咖啡粉按1:10的比例用85℃水冲调，过滤，备用，两样品均未经过特殊处理。 分组与给药：将小鼠随机分为六组，即阳性对照组（单纯茶水组和单纯咖啡组）、空白组（非烟熏组）、对照组（单纯烟熏组）、烟熏加茶水组，烟熏加咖啡组，每组10只，编号。单纯茶水组、烟熏加茶水组和单纯咖啡组、烟熏加咖啡组分别给予茶水和咖啡样品。给药剂量均为20ml/Kg，空白组和对照组给予相同剂量的生理盐水，烟熏前3天开始灌胃给样品，然后每次烟熏前30min灌胃，并连续至实验结束。 小鼠被动吸烟：将对照组，烟熏加茶水组，烟熏加咖啡组小鼠放入15 cm ×25 cm ×18 cm的长方体自制吸烟箱中熏烟,熏烟箱盖顶有一排小口,每次插入5根香烟。当烟雾达到视线模糊的时候,用纱布将通风口罩住,使小鼠被动吸烟(熏烟过程中保持熏箱中的烟雾浓度）。每次熏烟2 h,期间每隔30min打开盖透气5 min,重复4次。而阳性对照组、空白组只在无烟的相同环境中暴露相同时间。 测定指标：一周后，处死小鼠，取材测定相应指标。 每只小鼠摘眼球采血1.5ml左右，肝素抗凝后测定红细胞脆性。 采用10 g/L的Nacl溶液和蒸馏水分别配置2.5～7.0 g/L 的10种不同浓度的Nacl溶液(间隔浓度为0.15 g/L) ,每支试管加入4ml配制的Nacl和1滴(0.05ml)抗凝血标本,双手搓动、混匀,将加入血液的试管置于室温2 h后取出,观察,判定开始溶血管和完全溶血管,并读出该管的Nacl浓度。 将取出的小鼠血液3000转/分离心10分钟后取血浆，检测血浆中SOD活性和MDA含量。 每组取出小鼠的肝、肾组织，用预冷至4℃ 生理盐水冲洗表面残血，称重后研磨成匀浆，离心(3000转/分，10分钟），取上清液冷冻至-20℃冰箱中。采用氮蓝四唑(NBT)光化还原法检测肝、肾中的SOD含量，TBA比色法测定MDA含量。 5.统计学处理： 实验结果以均数±标准差(±S)表示，组间比较采用成组t检验，检验水准α=0.05。 参考资料 〔1〕孟志卿等 苹果汁对吸烟小鼠肝、肾、肺SOD和MDA的影响 江西农业学报　2009, 21 (10) : 123～124 〔2〕陈林等 瓜蒌、桃仁、鱼腥草对被动吸烟大鼠肺损伤的保护作用研究 201203 〔3〕阮瑰等 吸烟对微循环的影响以及脂质过氧化的中介和自由基清除剂的保护作用 1997, 7( 4) : 3～4 附：实验原始数据记录表 表1 小鼠烟熏情况记录表 日期 组别 烟熏开始时间 烟熏结束时间 实验者 备注 表