DNA重和基因转移.ppt

第七章 DNA重组和基因转移 第一节 目的基因与载体的连接 一、粘末端DNA片段的连接 二、平末端DNA片段的连接 1、直接用T4连接酶连接 2、同聚物加尾法 3、衔接物连接法 三、载体与DNA片段酶切位点不匹配的连接  四、cDNA与载体的连接 第二节 重组DNA分子的筛选与鉴定 外源基因与载体连接后转化大肠杆菌可能的三种情况： 一、遗传检测法 （一）根据载体表型特征选择重组体分子 2、α—互补 例；pUC质粒 二、物理检测法 1、凝胶电泳检测法 2、R-环法 三、核酸杂交检测法 例：原位杂交筛选重组体菌落(或噬菌斑) 四、免疫化学检测法 五、DNA-蛋白质筛选法 六、转译筛选法 1．杂交抑制转译 2、杂交选择转译 第三节 基因转移方法 一、重组DNA导入大肠杆菌 （二）转染 （2）λ噬菌体的体外包装 λ噬菌体的体外包装的原理： 二、重组DNA导入植物细胞的方法 （一）载体介导的转化方法 （2）叶盘共培养法 图 （3）悬浮细胞或愈伤组织共培养 （4）活体接种(inoculation in vivo) 2、病毒介导的基因转移 （1）双链DNA病毒转化载体 （二）DNA直接导入法 1、物理方法 基因枪示意图 （2）电激法(electroperation) （3）微注射法（micro-injection） （4）激光微束法(l