专题2-2动物细胞工程jgd.ppt

2、突变体的利用 突变体产生（原因？过程？） 3、细胞产物的工厂化生产 1）、种类: 2）、利用的枝术:组织培养 3)、过程:  植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 那么动物细胞常用的技术手段 呢？ 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 培养器皿 大规模的生产生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体为基因工程技术提供受体细胞 培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植有毒物质的检测细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据 动物细胞全能性随细胞分化程度提高受到限制，但细胞核具有全能性，那么怎样将动物细胞的全能性表达? 过程 知识结构 动物细胞培养和核移植技术 单克隆抗体制备过程 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合、筛选 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 单克隆抗体 （2）过程 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 B-B细胞 B-瘤细胞 瘤-瘤细胞 杂交瘤细胞（ B-瘤细胞） 克隆化培养 抗体检测 能产生特定抗体、培养条件下能无限增殖的杂交瘤细胞 体外培养 小鼠腹腔内增殖 单克隆抗体 第一次筛选 用特定的选 择性培养基 第二次筛选 经免疫的小鼠 提取 二、单克隆抗体的制备 如何大量生产单克隆抗体？ 利用B淋巴细胞 的功能 利用骨髓瘤细胞 的特性 利用 技术将两种细胞融合获得具有B淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用 技术大量培养杂交瘤细胞 产生抗体 无限增殖 动物细胞融合 动物细胞培养 二、单克隆抗体的制备 动物特异性免疫 分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,---Bn） 细胞融合——三种融合方式:（BB;BG;GG） 单抗的制备过程要点： 对小鼠注射特定的抗原蛋白 二、单克隆抗体的制备 4. 第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G---BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。） 单抗的制备过程要点： 二、单克隆抗体的制备 5. 第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列 ，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。 6. 选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。 7. 提取单克隆抗体。 二、单克隆抗体的制备 单抗的制备过程要点： 3）、如何进行第2次筛选？ 培养在多孔培养板上，每孔只有一个杂交瘤细胞。 1）、本过程利用了哪些技术手段？ 细胞融合和动物细胞培养，（免疫原理） 2）、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 二、单克隆抗体的制备 小结： 既能无限增殖，又能产生特异性抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞 目标 抗原—抗体的特异性结合 在选择性培养基中添加某种药物，特异性杀死骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞自身融合的细胞 原理 第二次筛选 第一次筛选 比较项目 4）、为何要进行两次筛选？ 二、单克隆抗体的制备 2.单克隆抗体的应用： ②作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质细微差别，并与特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速 ①在基础理论研究中具有重要意义 单克隆抗体的优点：特异性强、灵敏度高、产量大 二、单克隆抗体的制备 ③用于 运载药物：制成“生物导弹” 治疗疾病：主要用于癌症治疗 既不损伤正常细胞，又减少了用药剂量。 生物