实验七PCR扩增技术.pptVIP

实验七 PCR扩增技术 【实验目的】 学习PCR方法体外扩增DNA的基本原理，掌握PCR技术的常规操作，了解PCR引物及参数的设计。 【实验原理】 多聚酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)的原理类似于DNA的天然复制过程，利用半保留复制的原理，以待扩增的DNA为模板，在体外由引物介导的酶促合成特异DNA片段。 PCR扩增经变性、退火和延伸若干个循环后，DNA扩增2n倍。 PCR具体过程 模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至94 ℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链的氢键断裂, DNA解离成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备； 模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，使PCR反应体系温度降至50-60 ℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合 引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链,重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 上述3步为一个循环，即高温变性、低温退火、中温延伸3个阶段。 从理论