从活细胞中纯化DNA.ppt.pptVIP

* Three distinct kinds of DNA are needed to be prepared: total cell DNA; plasmid DNA; phage DNA. 3.1 全细胞DNA的制备 全细胞DNA是目的基因的材料来源，因此是必须得到的。我们通过学习细菌的全细胞DNA的制备，来了解DNA制备的基本知识。随后，我们再讲解质粒和噬菌体DNA的制备过程。 从细菌培养物中制备全细胞DNA的步骤： （1）培养细胞的生长和收集（harvested）； （2）细胞的破碎及内含物(content)的释放； （3）从细胞抽提物（cell extract）中除去DNA外的其他所有成分； （4）DNA溶液的浓缩(concentrated)。 3.1.1 细菌培养物的生长和收集 培养细菌需要培养基（culture medium），M9和LB培养基是两种典型的细菌培养基。 M9是一种确定成分培养基（defined medium），其中的所有成分是可知的。这种培养基包含的无机营养成分（inorganic nutrients)的混合物为细菌的生长提供基本元素，如氮，镁和钙，葡萄糖(glucose)提供碳源和能量。在实际应用中，还必须向M9中添加额外的生长因子，如微量元素和维生素。需要添加何种成分要视情况而定。 Luria-Bert