知识点3菌种选育和保藏.pptVIP

知识点3.1第一节 工业生产常用的微生物及要求第二节 工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏 知识点3.1 第三节 工业微生物菌种的选育第四节 生产菌种的改良第五节 种子的扩大培养 第一节 工业生产常用的微生物及要求 一、工业生产常用的微生物 ⒈ 细菌 工业生产常用的细菌有：枯草芽孢杆菌、醋酸杆菌、棒状杆菌、短杆菌等。 用于生产淀粉酶、乳酸、醋酸、氨基酸和肌苷酸等等。 ⒉ 酵母菌 工业上用的酵母菌有：啤酒酵母、假丝酵母、类酵母等。 分别用于酿酒、制造面包、生产脂肪酶(lipase)以及生产可食用、药用和饲料用酵母菌体蛋白等。 ⒊ 霉菌 工业上常用的霉菌有：藻状菌纲的根霉、毛霉、犁头霉，子囊菌纲的红曲霉，半知菌类的曲霉、青霉等。它们可用于生产多种酶制剂、抗生素、有机酸及甾体激素(steroid hormone)等。 ⒋ 放线菌 在液体浸没培养中由于搅拌器的剪切应力作用，常常形成短的分支旺盛的菌丝体，或呈分散生长，或呈菌丝团状生长。 放线菌的最大经济价值在于能产生多种抗生素(antibiotic)。 从微生物中发现的抗生素，有60％以上是放线菌产生的，如链霉素、红霉素、金霉素、庆大霉素等。 常用的放线菌主要来自以下几个属：链霉菌属、小单孢菌属和诺卡菌属等。 ⒌ 担子菌 ⒍ 藻类 二、微生物工业对菌种的要求 ⑴ 原料廉价、生长迅速、目的产物产量高； ⑵ 易于控制培养条件，酶活性高，发酵周期较短； ⑶ 抗杂菌和噬菌体的能力强； ⑷ 菌种遗传性能稳定，不易变异和退化，不产生任何有害的生物活性物质和毒素，保证安全生产。 第二节 工业微生物菌种的衰退、复壮与保藏 一、微生物菌种的衰退 ⒈ 菌种衰退的原因 菌种衰退的原因有两个方面： 一是菌种保藏不妥； 二是菌种生长的条件要求没有得到满足，或是遇到不利的条件，或是失去某些需要的条件。 此外还有经诱变得来的新菌株发生回复突变，从而丧失新的特征等情况。 菌种的自发突变和回复突变是引起菌种自身衰退的主要原因。 微生物细胞在每一世代中的突变概率一般为10-8～10-9，保藏在0～4 ℃时这一突变概率更小，但仍然不能排除菌种衰退的可能。 菌种的回复突变是指突变菌株因遗传组成的自身修复，使原有的遗传障碍解除，代谢途径发生变化，从而恢复原有的特性，表现出原育种过程中已获得的优良性状的退化。 突变不完全造成菌体遗传组成的差异。 ⒉ 菌种性能的改变 ⑴ 菌种遗传特性的改变 ① 异核现象导致微生物群体发生变异。 ② 自发突变导致菌种遗传特性改变。 ③ 突变所产生的变种或杂交重组所形成的杂种往往不稳定，容易发生回复突变或产生分离子，以致在菌种这一群体中形成具有不同基因型（亦称遗传型）的个体。 比较：基因型和表 型 ② 菌种培养基可通过影响菌种的生理状况而影响发酵产量。 ③ 在某些培养条件下，菌体的某些基因处于活化状态或阻遏状态，而使菌种的生理状态改变。 ⒊ 防止菌种衰退的措施 ⑴ 菌种的分离 如芽孢杆菌 如AT3.942栖土曲霉 ⑵ 菌种的复壮 狭义的复壮与广义的复壮 比较：正突变和负突变 ⑶ 提供良好的环境条件 发酵生产上一般只用三代内的菌种 ⑷ 用优良的保藏方法 ⑸ 定期纯化菌种 二、菌种的复壮 ⑴ 纯种分离 菌落纯 细胞纯 ⑵ 通过寄主体进行复壮 如杀螟杆菌 ⑶ 淘汰已衰退的个体 如“5406”菌种 三、菌种的保藏 ⒈ 菌种保藏的原理 ⒉ 菌种保藏方法 ⑴ 斜面低温保藏法 ⑵ 液体石蜡封存保藏法 ⑶ 固体曲保藏法 ⑷ 砂土管保藏法 ⑸ 冷冻干燥法 ⑹ 液氮超低温保藏法 ⒊ 菌种保藏的注意事项 ⑴ 菌种在保藏前所处的状态 ⑵ 菌种保藏所用的基质 低温保藏斜面培养基，碳源比例应少些，营养成分贫乏些较好，否则易产生酸，或使代谢活动增强，影响保藏时间。 ⑶ 操作过程对细胞结构的损害 冻结速度 真空干燥程度 第三节 工业微生物菌种的选育 ⒉ 从自发突变体中获得菌株 自然突变是指在自然条件下出现的基因变化。 微生物的代谢调节系统趋向于最有效地利用环境中的营养物质，优先进行生长和繁殖，而生产菌种（突变株）常常是打破了原有的代谢调节系统的突变株，因此常常表现出生活力比野生菌株弱、遗传特性不够稳定的特点。 二、诱变育种的程序 比较：野生菌株与突变菌株 比较：负变异株与正变异株 ⒈ 出发菌株的选择 ⒉ 菌悬液的制备 ⒊ 前培养 ⒋ 诱变 ⒌ 变异菌株的分离和筛选 ⒋ 从突变到突变表型 突变基因的出现并不等于突变表型的出现，表型的改变落后于基因型改变的现象称为表型迟延。 表型迟延有两种原因： 分离性迟延 生理性迟延 前突变 突变 突变表型 比较：基因型与表型 ㈡ 诱变剂的种类及选择 ⒈ 诱变剂 物理诱变剂和化学诱变剂 ⒉ 影响诱