第四章 植物细胞工程的基本原理和技术基础.ppt

固体培养方式的优点和缺点 优点:1）实验设备要求简单；2）培养时占用空间少； 缺点：1）外植体只有一部分表面能接触培养基，容易造成培养基中营养物质的浓度差异，影响培养物的生长；2）外植体插入培养基的部分，常因气体交换不畅以及有毒代谢产物的积累而影响组织的呼吸或造成毒害；3）很难产生均匀一致的细胞群。 （一）母液的配制与保存 培养基母液：在配制培养基前将培养基中常用药品混合或单独配制成比所需浓度高10-100倍的浓缩液。 配制培养基时应注意的问题 1）培养基的各类成分可以配成母液，配制培养基时按比例吸取即可； 2）配制大量元素无机盐的母液时，要防止在混合各种盐时产生沉淀； 3）植物生长物质母液配制时要注意不同激素的溶解性质； 4）药品的称量和定容都要准确； 5）配好的培养基要调pH值。 * 高硝态氮培养基：代表性培养基有B5、N6、SH。特点是：硝酸钾浓度高，氨态氮浓度低，含有较高浓度的硫胺素（VB1） * 在国内已广泛应用于小麦、水稻及其他植物的花药培养和其他组织培养。 * * 通常需要等前一种化合物完全溶解后再加入后一种化合物，对于易发生沉淀的试剂单独溶解后再与别的已完全溶解的药品混合，同时要慢慢地混合，边混合边搅拌。如大量元素中的硫酸镁、磷酸二氢钾和氯化钙 * * IAA、IBA、GA、ZT先溶95%酒精再定容； NAA先溶于热水, 95%酒精再定容； 2，4-D先溶于1 N NaOH,再定容； KT、BA先溶于1 N HCl,再定容。 * 高温灭菌会降低pH值(约0.2—0.3个pH值)，因此在配制时常提高pH值0．2—0．3单位。 * 植株种类及外植体的不同，其最适温度也是不同的。如百合20℃；月季25－27℃；番茄28℃。 * 光调节植物整个生长发育过程，以便更好地适应外界环境。人们已经逐渐认识到植物的生长发育，即植物种子的发芽、组织分化、花芽分化等广泛地受控于光。植物依赖光控制细胞的分化，及其结构和功能的改变，最后形成组织和器官，这个过程是光形态建成(photomorpho-genesis)的过程，即光控制发育的过程。相反，黑暗中生长的植物表现出各种黄化特征，如茎细而长、顶端呈钩状弯曲和叶片小而且是黄白色，这种现象被称为暗形态建成skotomorphogenesis)。在光形态建成的过程中，光只作为信号激发受体，使细胞内产生一系列的反应，表现为形态结构发生变化。给黄化幼苗一个微弱的闪光，在几小时之内便可以观察到一系列光形态建成的去黄化反应，如茎伸长减慢、弯钩伸展，合成叶绿素等。 Lx,又写作lux.光强单位。 愈伤组织不需要光照？不同的光因子对不同植物愈伤组织的生长均有不同的效应。周吉源等在石刁柏愈伤组织培养的试验中发现：不同光质处理的愈伤组织生长曲线有一定的差异，各处理的生长曲线相互交叉，15d后，明显可分为2组，蓝光、红光和黄光为1组，增重较快；白光、绿光、黑暗为1组，增重较慢。可见，蓝光、红光对愈伤组织的生长具有明显的促进作用。而倪德祥等曾报道红光不利于凹叶景天愈伤组织的生长。 樱桃的离体生根培养 * * 湿度过低会使培养基丧失大量水分，导致培养基各种成分浓度的改变和渗透压的升高，进而影响组织培养的正常进行。湿度过高时，易造成污染。 * ?在建立一个新的实验体系时，为了能研制出一种适合的培养基，最好先由一种已被广泛使用的基本培养基(如Ms培养基或B5培养基)开始。当通过一系列的实验，对这种培养基做了某些定性和定量的小变动之后，即有可能得到一种能满足实验需要的新培养基，选择最佳培养基。常用试验方法主要有单因子试验、多因子试验及广谱实验等。???? 一、单因子试验在单因子试验中．由于培养基中其他成分都维持在一般水平上，所以只变动一个因子，就可以找出这一因子对试验的影响和影响的程度。例如Ms基本培养基的其他成分和用量都不变，只变动NAA用量对某一培养物生根的影响，这种只研究一个因素的试验就是单因子试验。生物学试验不同于物理学或化学试验，最显著的差别是在生物学试验中必需设置对照组与试验组，试验组可以有一组或几组，随试验的复杂性而设置，对照组也可能有一组以上。试验中要求对照组与试验组中的试验个体，即植物组织块或其他培养物，必须在遗传性、生理状态、前培养条件等方面，尽可能完全一致。以保证试验结果是来源于试验因子，而不是由于试验材料的不一致导致的。???? 试验中各处理一般都要设有一定的重复，以取得可靠的试验结果。随试验规模和要求不同，大多每个项目要有4—10瓶，每瓶至少3块培养物或3丛小幼苗。???? 二、多因子试验 ? 对培养基中两个或两个以上因素进行研究的试验称为多因子实验，试验可采用完全试