費洛蒙的抽取與分離.ppt

分子量 高解析度的質譜儀，量到小數點5位， 分子量同樣是58的丙酮和丁烷，就可以分出來 丙酮：C3 H6 O 3 x C =36.00000 6 x H =6.04695 1 x O =15.99491 總共 58.04186 丁烷： C4 H10 4 x C =48.00000 10 x H = 10.07825 總共 58.07825 推測分子式 化學方法 困難在於費洛蒙量很少，易受雜質干擾。 反應之後，就沒有該費洛蒙了。 只要很少的量就可以做反應了，做衍生物，對該化合物有所瞭解。 費洛蒙的抽取與分離 賀孝雍 費洛蒙的來源 雌蟲還是雄蟲？還是兩者都釋放？ 是由身體的拿個部位釋放？腹部？胸部？ 是否有特殊的腺體？ 是直接釋放費洛蒙，還是腺體中的成分，進一步變化成具揮發性的化合物？ 需要知道何時釋放費洛蒙？持續釋放？還是有calling 的時段？ 測量一下釋放的量大約是多少？ 抽取時的注意事項 費洛蒙的量很少，所以要注意 抽取時的損失。 是否會有化學變化？ 例如：酸？鹼？氧化？酵素作用？ 是否會被污染？ 例如：溶劑中的雜質，塑膠製品中的增塑劑等等 抽取的方法 用溶劑淬取 通常是把蟲體磨碎，用適當極性的溶劑溶解，過濾，然後濃縮。 溶劑的選擇，因為不知費洛蒙的性質，通常要用不同極性的溶劑，有極性低的開始，然後逐漸升高極性。 一般會用費點滴的溶劑，比如說戊烷，二氯甲烷。 為了減少溶劑中不純物的干擾，溶劑通常要先經過蒸餾。 溶劑抽取 整隻蟲體的淬取： 優點是不需要先知道是蟲體的哪一部份釋放費落蒙； 缺點是會有很多很多的雜質。 腺體的淬取： 優點是不會有太多的雜質 缺點是要預先知道釋放費落蒙的腺體位置，而且需要有解剖的技術。 產卵管腺體的浸洗：將蛾類的腺體擠出來，浸泡在己烷或庚烷中。 溶劑 先蒸餾過再用， 乙醚中有一種安定劑，戊烷中有其他的碳水化合物。 橡皮塞，塑膠製品盡量少用 用鐵福龍，不要用paraffin tape 常用的溶劑： 非極性：pentane, hexane 中極性：dichloromethane 高極性：methanol 溶劑 要先蒸餾過再用。 不要使用任何塑膠器具。 所有的玻璃器皿要非常乾淨。 不要用任何潤滑劑，只用teflon。 抽氣法 蟲子還活著，抽氣的方法可以抽很久 抽氣的方法，抽到的是實際釋放出來的化合物而不是前驅物。 提供食物，會有食物的味道，所以還要做一個只有食物的對照組。 空氣要經過純化，把雜質去掉。最常用活性炭過濾空氣。 抽氣法 Cold trapping 用液態氮或其他低溫方法的溫度冷凝費落蒙： 會有水氣一起冷凝下來。 固體吸附 用活性炭， porapak-Q, Tenax （是多孔性高分子聚合物） 然後用有機溶劑洗下來，或是熱反吸附法。但是會有化合物變質的顧慮。 固體抽氣法 SPME (Solid phase microextraction) 固相淬取 No solvent required 分離的方法 蒸餾法： 把多餘的溶劑蒸餾出來，或是把要的成分蒸餾出來，以便和高沸點的脂肪類，蠟質分開。 層析法： TLC:展開後，將要的成分，刮下後，用有機溶劑溶出。 Column chromatography: Sep-pak不需要自己填充，有現成的可用，注意要用玻璃管柱。 分離的方法 GC： 樣品注入後揮發，根據樣品與管柱上的成分吸附力的差異，而分開。 根據要分析樣品的成分，決定要使用的管柱。eg. Db-1, db-5, db-17, db-wax 等等 偵測器使用最多的是火焰偵測器。FID, 適用於任何化合物。靈敏度高，對水，二氧化碳，載體氣體都沒有反應。不受溫度，氣體流速等的影響，基線很穩定。 用在定量時，也有一致性。 缺點是：樣品被燒掉了。 GC 適合分析費洛蒙的原因 分析高揮發性的成分 速度快 解析度高 可以定量 如果將樣品流出時，分成兩邊，則可以邊偵測，邊收集樣品。 分離的方法 HPLC： 用來分析高極性，低揮發性，或是對熱不穩定的化合物。 靈敏度不如 GC 偵測器是ＵＶ，或是折光率（ＲＩ）。 ＵＶ　只能偵測有ＵＶ吸收的化合物。 ＲＩ可以偵測所有化合物。 有 normal phase, reverse phase 的管柱。 用在分離並取得樣品上，很有用。 生物檢測 用ＨＰＬＣ分離後得到的每一管，都要做生物檢測。 ＧＣ的話可以同時測每一個成分對昆蟲觸角，有沒有反應。 可以馬上在眾多成分中找到有效成分。有時在ＦＩＤ是很小的，但是蟲子觸角的反應卻是很大。因此找到費洛蒙， GC-EAD 結構鑑定 物理方法 ＧＣ─ＭＳ ＩＲ ＵＶ─ＶＩＳ ＮＭＲ 化學方法 製作各種衍生物 ＧＣ─ＭＳ ＭＳ　是靈敏最高的方法 可以得知：分子量，元素結構，構造相關資訊。 質譜儀的構造與原理 質