PCR及分子杂交.ppt

聚合酶链反应技术 第一节 聚合酶链反应技术的原理 一、聚合酶链反应技术的简史 Watson、Crick：DNA双螺旋结构 Meselson、Stahl:半保留复制模型。 Khorana：最早提出体外扩增核酸的设想 Kary. B. Mullis：发明聚合酶链反应 Saiki：发现耐热DNA聚合酶 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 PCR的基本原理 PCR反应条件 PCR过程 PCR的特点 在下一轮循环中，DNA双链再经变性、退火、延伸三步, 模板DNA数量翻一倍(假设扩增效率为100%)。如此反复循环，便可使DNA以指数形式进行扩增。每完成一个循环需2～4min， 2～3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期（plateau）所需循环次数取决于样品中模板的拷贝数。 （六）PCR一般方案 1．50 ul PCR反应体系的组成 1）组成： ①样品DNA 0.1～1ug； ②正链引物（25umol/L）1.0ul； ③负链引物（25umol/L）1.0