第十节 谷甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力测定.docVIP

1.3.6.2 血或组织中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH－Px）活力测定 1.3.6.2.1 原理 谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）是体内存在的一种含硒清除自由基和抑制自由基反应的系统。对防止体内自由基引起膜脂质过氧化特别重要，其活力以催化GSH氧化的反应速度，及单位时间内GSH减少的量来表示，GSH和5,5’-二硫对硝基苯甲酸（DTNB）反应在GSH-Px催化下可生成黄色的5-硫代2-硝基苯甲酸阴离子，于423nm波长有最大吸收峰，测定该离子浓度，即可计算出GSH减少的量，由于GSH能进行非酶反应氧化，所以最后计算酶活力时，必须扣除非酶反应所引起的GSH减少。 1.3.6.2.2 试剂和仪器 仪器：可见光分光光度计、酶标仪、低温高速离心机、匀浆器、恒温水浴锅、微量加样器 试剂：叠氮钠磷酸缓冲液 pH7.0 NaN3 16.25mg 终浓度2.5mmol/L EDTA-Na2 7.44mg 终浓度0.2mmol/L Na2HPO4 1.732g 终浓度0.2mol/L NaH2PO4 1.076g 终浓度0.2mol/L 加蒸馏水至100mL，用少量HCL、NaOH调pH7.0，4℃保存。 1mmol/L谷胱甘肽（还原型GSH）溶液 GSH 30.7mg加叠氮钠磷酸缓冲液至100mL，临用前配制，冰冻保存1－2日。 1.25－1.5mmol/LH2O2溶液 取30％H2O2