扬州大学广陵学院高效液相色谱法答案.ppt

* 光电二极管阵列检测器 二极管阵列检测器是一种新型紫外吸收检测器，可同时进行吸光度、时间和波长的三维检测，通过计算机处理，画出三维立体山峰形状的图形。 * 示差折光检测器是一种通用型检测器。它的作用原理是纯流动相与包含样品的流动相之间的折射率不同，检测器把这种差值检测出来，给出信号，信号的大小与样品含量成正比。 纯流动相与待测组分的折射率相差越大，检测器灵敏度越高。 通用性强，不破坏样品，线性范围宽。主要缺点是灵敏度低，不适宜痕量分析。对温度变化敏感，不能用于梯度淋洗。 （2）示差折光检测器 * （3）荧光检测器 荧光检测器是一种专用型检测器，具有高灵敏度和高选择性，检测灵敏度比紫外高100倍。应用较多，仅次于紫外吸收。它用于能激发荧光的化合物。 工作原理是：用紫外光照射某些化合物时它们可受激发发出荧光，测定发出的荧光即可定量。 * 它包括脱气、梯度淋洗、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置。其中梯度淋洗装置是高压液相色谱仪中尤为重要的附属装置。 HPLC梯度淋洗与GC中的程序升温一样。 对于某些复杂样品，组分的k范围很宽，用一种强度的溶剂淋洗时不能得到很好的分离，采用梯度淋洗。就是组成流动相的两种或两种以上不同的溶剂按一定程序改变配比、极性、pH、离子强度，通过流动相极性的变化来改变待分离样品的选择因子和tR，提高分离效果和分析速度。 5、附属系统 * 梯度洗脱 优点： 可提高分离度、缩短分离时间和提高分离精度 * 3-3高效液相色谱的固定相和流动相 一、固定相 固定相以承受高压能力来分类，可分为刚性固体和硬胶两大类。 刚性固体：以二氧化硅为基质，可承受7.0×108～1.0×109Pa的高压。 硬胶：主要用于离子交换和尺寸排阻色谱中，它由聚苯乙烯与二乙烯苯基交联而成。可承受压力上限为3.5×108Pa。 * 二、流动相 由于流动相是液体，它对组分有亲和力，并参与固定相对组分的竞争。因此，正确选择流动相直接影响组分的分离度。 1.对流动相溶剂的要求： （1）溶剂对于待测样品，必须具有合适的极性和良好的选择性。 （2）溶剂要与检测器匹配 对于紫外吸收检测器，应注意选用检测器波长比溶剂的紫外截止波长要长。 对于示差折光检测器，要求选择与组分折光率有较大差别的溶剂作流动相，以达最高灵敏度。 * （3）高纯度 由于高效液相色谱灵敏度高，对流动相溶剂的纯度也要求高。不纯的溶剂会引起基线不稳，或产生“伪峰”。痕量杂质的存在，将使紫外截止波长值增加50～100 nm。 （4）化学稳定性好 不能选与样品发生反应或聚合的溶剂。 (5)低粘度 若使用高粘度溶剂，势必增高压力，不利于分离。但粘度过低的溶剂也不宜采用，例戊烷、乙醚等，它们易在色谱柱或检测器内形成气泡，影响分离。 20 * 2. 流动相及流动相的极性 流动相——在液相色谱中显得特别重要——显著改变组分分离状况。流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。 流动相极性——亲水性固定液常采用疏水性流动相，非极性固定液选用极性流动相。 * 3. 流动相的组成 ——按组成不同可分为单组分和多组分； ——按极性可分为极性、弱极性、非极性； ——按使用方式有固定组成淋洗和梯度淋洗。 ——常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、甲醇、乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 * 根据分离机理不同，液相色谱可分为： 液固吸附色谱法 液液分配色谱法 化合键合相色谱法 *** 离子交换色谱法 分子排阻色谱法 3-4高效液相色谱法的主要类型及选择 * 一、液一固吸附色谱法(LSAC) 液一固吸附色谱是以固体吸附剂作为固定相，吸附剂的表面存在吸附中心。 液固色谱实质是根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。 3-4高效液相色谱法的主要类型及选择 * 3-4高效液相色谱法的主要类型及选择 二、液一液分配色谱法（LLPC） 在液-液色谱中，流动相和固定相都是液体,它适用于各种样品类型的分离和分析，无论是极性的和非极性的，水溶性和油溶性的，离子型的和非离子型的化合物。 1．分离原理 液液分配色谱的分离原理是根据物质在两种互不相溶的液体中溶解度的不同，具有不同的分配系数。使各种复杂组分分离。 * 2、固定相 由于液液色谱中流动相