第五章 干细胞程.doc

第五章：干细胞工程 主要知识点： 干细胞的基本概念 干细胞的类型 胚胎干细胞系 成体干细胞 干细胞与组织工程 人类干细胞研究的应用 教学内容： 一、干细胞的基本概念 干细胞： 具有自我复制的能力，在一定条件下能分化成各种功能细胞。 全能干细胞： 包括胚胎干细胞（embryonic stem cells, ES细胞）, 早期胚胎（4-5天）胚泡中内细胞群（inner cell mass, ICM），生殖干细胞（embryonic germ cells, EG细胞），具有全能性，能分化成全身200多种细胞类型， 进一步形成机体的任何组织和器官。 多能干细胞： 具有分化成多种细胞和组织的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力。如：内、中、外三个胚层的各种细胞。 专能干细胞： 多能干细胞进一步分化成具有专门功能细胞的干细胞。如：造血干细胞、皮肤干细胞、神经干细胞等。专能干细胞又分化为定向干细胞，如：造血干细胞可分化为红细胞系定向干细胞、粒细胞系定向干细胞…… 胚胎生殖细胞(embryonic germ cell, EG cell ) ： 来自于早期胚胎（5-10周）胎儿生殖嵴的原生殖细胞，也属于全能干细胞。但与胚胎干细胞在特征上并不相同。? 成体干细胞(somatic)： 出现在已特化的组织中的未分化或未特化的细胞，能够自我更新，并且产生它来源的所有特化类型的组织细胞，通常成体干细胞分裂产生祖细胞，后者分化成熟为组织细胞。? 可塑性(plasticity)： 一种组织类型的干细胞转化为另一种组织类型的细胞的能力。 畸胎瘤细胞（embryonic carcinoma cell, EC cell)： 源于胚胎组织，保留胚胎组织特点的肿瘤。 祖细胞(progenitor cell)： 存在于胎儿或成体组织中，部分地特化化，分裂产生继续分裂的祖细胞或分化的细胞。 二、干细胞的分类 按分化潜能大小来分类: 全能干细胞（ Totipotent stem cell ）： 它具有形成完整个体的分化潜能。如受精卵，胚胎干细胞。 多能干细胞（ pluripotent stem cell ）： 具有分化出多种组织细胞的潜能，但却失去了发育成完整个体的能力，发育潜能受到一定的限制。如骨髓多能造血干细胞是典型的例子，它可分化出至少十二种血细胞 。 专能干细胞（ multipotent stem cell ）， 这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化，如上皮组织基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。 根据来源来分: 来源于胚胎--- 胚胎干细胞 ESC （Embryonic Stem Cell ） 胚胎性生殖细胞 EGC （Embryonic Germ Cell ） 来源于成体--- 成体干细胞 ASC （Adult-derived Stem Cell ） 根据干细胞组织发生的名称进行分类: 胎胎干细胞 造血干细胞 骨髓间质干细胞 肌肉干细胞 成骨干细胞 内胚层干细胞 视网膜干细胞 胰腺干细胞 三、胚胎干细胞 1、来源： (1) 发育良好的囊胚，从中分离内细胞群细胞ES细胞 (2) 从5-9周的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞（embryonic germinate cells） (3)恶性胚胎肿瘤或畸胎瘤细胞（embryonal carcinoma, EC) (4) 生殖克隆（治疗性克隆）：体细胞核转移（SCNT） 2、胚胎干细胞的分离 酶消化 免疫方法去除滋养层细胞 流式细胞仪分离法 3、培养条件： (1) 特殊的培养液： 用DMEM培养液，其中胎牛血清的浓度和质量很重要，还要加非必须氨基酸；β-巯基乙醇。 (2) 以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞。 (3) 必须加入LIF，抑制细胞分化。 4、胚胎干细胞诱导分化 （1）加入诱导细胞分化的因子或化学物质，如VGEF、bFGF 、DMSO和RA等 （2）将ES细胞与特定的细胞共培养 （3）将某种分化诱导因子的基因转入ES细胞内 5. ES细胞的全能性主要体现在以下几方面： ①形成畸胎瘤。将ES细胞注人同源动物皮下可形成畸胎瘤，包括三个胚层细胞； ②形成类胚体。培养ES细胞在非粘附底物中悬浮生长，或控制增殖细胞数目。能够使之生成类胚体，它是一个与畸胎瘤相似的多种系混杂的集合体、具有三个胚层组织； ③直接分化。通过控制ES细胞生长环境，或遗传操纵特定基因表达，ES细胞可直接分化成某特定种系细胞，例如将神经决定基因NeuroD2和NeuroD3转人ES细胞，可使之分化为神经细胞； ④形成嵌合体。将ES细胞注