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第五章:干细胞工程
主要知识点:
干细胞的基本概念
干细胞的类型
胚胎干细胞系
成体干细胞
干细胞与组织工程
人类干细胞研究的应用
教学内容:
一、干细胞的基本概念
干细胞:
具有自我复制的能力,在一定条件下能分化成各种功能细胞。
全能干细胞:
包括胚胎干细胞(embryonic stem cells, ES细胞), 早期胚胎(4-5天)胚泡中内细胞群(inner cell mass, ICM),生殖干细胞(embryonic germ cells, EG细胞),具有全能性,能分化成全身200多种细胞类型, 进一步形成机体的任何组织和器官。
多能干细胞:
具有分化成多种细胞和组织的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力。如:内、中、外三个胚层的各种细胞。
专能干细胞:
多能干细胞进一步分化成具有专门功能细胞的干细胞。如:造血干细胞、皮肤干细胞、神经干细胞等。专能干细胞又分化为定向干细胞,如:造血干细胞可分化为红细胞系定向干细胞、粒细胞系定向干细胞……
胚胎生殖细胞(embryonic germ cell, EG cell ) :
来自于早期胚胎(5-10周)胎儿生殖嵴的原生殖细胞,也属于全能干细胞。但与胚胎干细胞在特征上并不相同。?
成体干细胞(somatic):
出现在已特化的组织中的未分化或未特化的细胞,能够自我更新,并且产生它来源的所有特化类型的组织细胞,通常成体干细胞分裂产生祖细胞,后者分化成熟为组织细胞。?
可塑性(plasticity):
一种组织类型的干细胞转化为另一种组织类型的细胞的能力。
畸胎瘤细胞(embryonic carcinoma cell, EC cell):
源于胚胎组织,保留胚胎组织特点的肿瘤。
祖细胞(progenitor cell):
存在于胎儿或成体组织中,部分地特化化,分裂产生继续分裂的祖细胞或分化的细胞。
二、干细胞的分类
按分化潜能大小来分类:
全能干细胞( Totipotent stem cell ):
它具有形成完整个体的分化潜能。如受精卵,胚胎干细胞。
多能干细胞( pluripotent stem cell ):
具有分化出多种组织细胞的潜能,但却失去了发育成完整个体的能力,发育潜能受到一定的限制。如骨髓多能造血干细胞是典型的例子,它可分化出至少十二种血细胞 。
专能干细胞( multipotent stem cell ),
这类干细胞只能向一种类型或密切相关的两种类型的细胞分化,如上皮组织基底层干细胞、肌肉中的成肌细胞等。
根据来源来分:
来源于胚胎--- 胚胎干细胞 ESC
(Embryonic Stem Cell )
胚胎性生殖细胞 EGC
(Embryonic Germ Cell )
来源于成体--- 成体干细胞 ASC
(Adult-derived Stem Cell )
根据干细胞组织发生的名称进行分类:
胎胎干细胞
造血干细胞
骨髓间质干细胞
肌肉干细胞
成骨干细胞
内胚层干细胞
视网膜干细胞
胰腺干细胞
三、胚胎干细胞
1、来源:
(1) 发育良好的囊胚,从中分离内细胞群细胞ES细胞
(2) 从5-9周的胚胎生殖腺中分离出人的EG细胞(embryonic germinate cells)
(3)恶性胚胎肿瘤或畸胎瘤细胞(embryonal carcinoma, EC)
(4) 生殖克隆(治疗性克隆):体细胞核转移(SCNT)
2、胚胎干细胞的分离
酶消化
免疫方法去除滋养层细胞
流式细胞仪分离法
3、培养条件:
(1) 特殊的培养液:
用DMEM培养液,其中胎牛血清的浓度和质量很重要,还要加非必须氨基酸;β-巯基乙醇。
(2) 以人或胚鼠的成纤维细胞为饲养细胞。
(3) 必须加入LIF,抑制细胞分化。
4、胚胎干细胞诱导分化
(1)加入诱导细胞分化的因子或化学物质,如VGEF、bFGF 、DMSO和RA等
(2)将ES细胞与特定的细胞共培养
(3)将某种分化诱导因子的基因转入ES细胞内
5. ES细胞的全能性主要体现在以下几方面:
①形成畸胎瘤。将ES细胞注人同源动物皮下可形成畸胎瘤,包括三个胚层细胞;
②形成类胚体。培养ES细胞在非粘附底物中悬浮生长,或控制增殖细胞数目。能够使之生成类胚体,它是一个与畸胎瘤相似的多种系混杂的集合体、具有三个胚层组织;
③直接分化。通过控制ES细胞生长环境,或遗传操纵特定基因表达,ES细胞可直接分化成某特定种系细胞,例如将神经决定基因NeuroD2和NeuroD3转人ES细胞,可使之分化为神经细胞;
④形成嵌合体。将ES细胞注
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