第六讲病毒的检测资料.ppt

* * * * * * * 293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系，横纹肌肉瘤RD细胞株 * 犬纤维肉瘤细胞 * 绿豆芽酶（Mung bean nuclease）可降解单股核酸，用它可进一步鉴定核酸是单股或双股。 亦可直接用纯化的病毒核酸通过电子显微镜观察，对其进行鉴定，但技术要求较高。 近年来PCR核酸测序技术使得病毒核酸型鉴定的可行性大为增加。 * Dulbecco于1952年建立了空斑试验（plaque assay），其方法是将10倍梯度稀释的病毒样本接种吸附于单层细胞，而后在细胞上覆盖一层含营养液的琼脂，以防止游离的病毒通过营养液扩散，但病毒可在细胞间传递。 经过一段时间培养，进行染色，原先感染病毒的细胞及病毒扩散的周围细胞会形成一个近似圆形的斑点，类似固体培养基上的菌落形态，称为空斑或蚀斑蚀斑（plaque）。 * * 负染是指通过重金属盐在样品四周的堆积而加强样品外周的电子密度，使样品显示负的反差，衬托出样品的形态和大小 * * * * 空斑形成单位（PFU） 仅计数含20-100个空斑的培养板。 Virus Plaques 病毒的空斑（据Madigan等） 病毒空斑 单层细胞 高稀释度 低稀释度 终点稀释法 终点稀释法（Endpoint dilution assay）用于测定几乎所有种类的病毒滴度，包括某些不能形成空斑的病毒，并可用以确定病毒对