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- 2016-11-30 发布于湖北
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* 高考生物必记知识点(选修3) 专题一 基因工程 1.作为载体的条件 ①能在宿主细胞中稳定保存并大量复制。 ②有一个至多个限制性核酸内切酶切割位点,以 便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因,便于筛选 2.载体的作用 ①作为运载工具,将目的基因转移到宿主细胞内; ②利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量复制。 3.DNA连接酶有Ecoli DNA连接酶和T4 DNA连接酶两 种,且DNA连接酶起作用时不需要模板。 4.限制酶在使用时的注意事项: ①切割目的基因和载体时,最好用同一种限制酶, 以产生相同的黏性末端。 ②在切割含目的基因的DNA分子时,需用限制酶切 割两次此DNA分子,产生4个末端。只有这样, 目的基因两端都有可连接的黏性末端或平末端。 ③限制酶切割位点应位于标记基因之外,不能破坏 标记基因,以便于进行检测。 5.未知序列的目的基因是无法从基因文库中获取的。 6. PCR技术扩增目的基因的过程: 加热至90~95℃DNA解链→冷却到55~60℃,引 物结合到互补DNA链→加热至70~75℃,热稳定 DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。 7.基因表达载体的构建 (1)目的:使目的基因在受体细胞中稳
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