1附件第六章菌种筛选解读.ppt

第六章 菌种的筛选与保藏 简介 微生物本身或其代谢过程中产生的众多的代谢产物，其中许多是对人类有应用价值的。获得发酵工业中的生产菌种的方法有——索取或购买，从自然界中分离筛选，对原由的菌种进行遗传改造。 第一节 从自然界中分离菌种 一、筛菌的一般步骤： 设计方案 采样 增殖培养* 平板分离 筛选(初筛、复筛) 单株纯种分离 性能考察 (生性能试验、毒性试验、菌种鉴定） 每一步骤的目的 可以省略的是哪一步？ （一） 采样：采集含菌的样品 采样中应考虑的几个问题 土壤中有机物的含量 采样的深度 离地表 5--20cm 处的土壤 植被情况 采土的季节 以春、秋两季为宜 采土样的方法 选好适当的地点后，用小铲子除去表土，取5--20 cm 处的土样几十克，盛入事先灭过菌的防水的袋中，并在上记录采土时间、地点和植被情况。采好的土样应尽快分离。 （二） 增殖培养（富集培养） 利用选择性培养基的原理，在土样中加入某些特殊的营养物，创造一些有利与待分离对象生长的条件，使其大量繁殖，从而有利于分离它们。也可以通过控制培养条件，达到富集的目的。 提高样品中目的菌所占比例 例如: 在土样中加入纤维素，可以富集纤维素分解菌。 增殖培养的方法 控制培养基的营养成分 控制培养基的pH 控制培养的温度 热处理 添加抑制剂 这些方法的适用范围 抑制不需要的菌类 （三） 纯种分离 将目的菌从混杂的群体中分离出来，获得纯培养。 菌株纯—— 一般纯种分离方法 细胞纯——小滴分离法、显微操纵器进行分离。 纯种分离的一般方法 稀释分离法 划线分离法 组织培养法 —— 适用于分离高等真菌和植物病原菌。 纯种分离的方法:稀释分离 划线分离 平板反应快速检出法 根据分离培养基上的特异反应来挑选目的菌的一种快速、简捷的方法。 与样品纯种分离同时进行 检测单菌落是否产目的产物，并对目的产物量进行粗略的估计 平皿反应快速检出法 纸片培养显色法 透明圈法 变色圈法 生长圈法 抑菌圈法 （1）纸片培养显色法 滤纸饱浸含有指示剂的液体培养基 用接种环接种 保湿恒温培养 据菌落周围变色圈和菌落直径比值判别目的物产量 （2）透明圈法 碳酸钙平板透明圈：产酸 （3）变色圈法 淀粉平板喷稀碘液：透明圈，液化型淀粉酶 支链淀粉平板喷稀碘液： 蓝色圈：异淀粉酶 无色圈：液化型淀粉酶 葡聚糖加刚果红平板：葡聚糖酶 木聚糖加刚果红平板：木聚糖酶 橄榄油加罗丹明B平板：脂肪酶 （4）生长圈法 适用：氨基酸，核苷酸，维生素产生菌的选育 工具菌： 营养缺酸型，不能合成的物质（生长因素）为目的菌积累的产物 菌落形态明显不同于目的菌 方法： 106 ~ 107 工具菌与样品稀释液一起涂布至琼脂培养基表面，具有生长圈的菌落即为目的菌 （5）抑制圈 适用：抗生素产生菌的选育 工具菌：对目的抗生素敏感的微生物 例：目的菌为产生抗G+细菌的抗生素的菌株 工具菌可使用金黄色葡萄球菌 方法 目的菌分离：稀释分离法，培养长出菌落 代谢物积累：用打孔器（6mm）将菌落连同周围琼脂培养基一起取下，放一无菌空培养皿内，保湿培养4-5天，使新产生抗生素积累于小琼脂块中 测定：取107工具菌涂布于球脂培养基，将小琼脂块放于上面培养过夜，抑菌圈的出现，说明琼脂块中有抗生素，大小说明抗生素单位的高低 (四) 筛选 对分离获得的纯培养菌株进行生产性能的测定，从中选出适合生产要求的菌株。 精确的性能测定——定量分析 筛选为什么要分为初筛和复筛进行？ 两者的区别 筛选条件如何确定 初筛和复筛的比较 五.培养工艺条件试验与生产实验 对获得的优良菌株进行全面的培养工艺条件试验 获得某菌株的优化培养工艺条件 摇瓶发酵条件： 培养基的组成、初始pH值、通风量、接种量、培养温度、培养时间等 小型台式发酵罐中进行优化 将试验规模放大到中试、大型发酵罐生产试验的水平 菌种鉴定—— 常规鉴定、分子鉴定 好氧培养（摇瓶发酵） 举例：产淀粉酶芽孢杆菌的分离筛选 采样地点的选择 增殖培养的方法 纯种分离 平板快速检测法 筛选 性能考察 保藏 举例 产蛋白酶芽孢杆菌的分离筛选 采样地点的选择 增殖培养的方法 纯种分离 平板快速检测法 筛选 性能考察 保藏 二、厌氧菌的培养法 去除培养基中的溶解