现代分子生物学第四章.ppt

在多肽合成过程中，由不同的tRNA将相应的氨基酸带到蛋白质合成部位，并与mRNA进行专一性的相互作用，以选择对信息专一的AA-tRNA。 核糖体还必须能同时容纳另一种携带肽链的tRNA，即肽基tRNA（peptidyl-tRNA），并使之处于肽键易于生成的位置上。 核糖体的功能 细菌核糖体上一般存在三个与氨酰-tRNA结合的位点: A位点(aminoacyl site),新到来的氨酰-tRNA的结合位点; P位点(peptidyl site),肽基酰-tRNA结合位点; E位点(Exit site),延伸过程中的多肽链转移到氨酰-tRNA上释放tRNA的位点。 只有fMet-tRNAfMet能与第一个P位点相结合，其它所有tRNA都必须通过A位点到达P位点，再由E位点离开核糖体。 每一个tRNA结合位点都横跨核糖体的两个亚基，位于大、小亚基的交界面。 核糖体上重要位点 Location of tRNAs Cate et al., Science 1999 4. 4 蛋白质合成的生物学机制 核糖体是蛋白质合成的场所，mRNA是蛋白质合成的模板，tRNA是模板与氨基酸之间的接合体。 蛋白质合成是一个需能反应。真核生物中可能有近300种生物大分子参与蛋白质的生物合成，这些组分约占细胞干重的35%。 氨基酸活化 肽链的起始 肽链的延伸 肽链的终止 新合成多肽链的折叠和加工 蛋白质的生物合成 阶 段 必 需 组 分 1．氨基酸的活化 20种氨基酸 ? 20种氨基酰-tRNA合成酶 ? 20种或更多的tRNA ? ATP，Mg2+ 2．肽链的起始 mRNA ? N-甲酰甲硫氨酰-tRNA ? mRNA上的起始密码子（AUG） ? 核糖体小亚基 ? 核糖体大亚基 ? GTP，Mg2+ ? 起始因子（IF-1，IF-2，IF-3） 3．肽链的延伸 功能核糖体（起始复合物） ? AA-tRNA ? 伸长因子 ? GTP，Mg2+ ? 肽基转移酶 4．肽链的终止 GTP ? MRNA上的终止密码子 ? 释放因子（RF-1，RF-2，RF-3） 5．折叠和加工 参与起始氨基酸的切除、修饰等加工过程的酶 蛋白质合成各阶段的主要成分简表 1.氨基酸的活化 20种氨基酸 20种氨酰-tRNA合成酶 20种或更多的tRNA ATP Mg 2+ 氨基酸必须在氨酰－tRNA合成酶的作用下 生成活化氨基酸——AA-tRNA *同一氨酰-tRNA合成酶具有把相同氨基酸加到 两个或更多个带有不同反义密码子tRNA分子上的功能。 真核生物起始tRNA是Met-tRNAMet， 原核生物起始tRNA是fMet-tRNAfMet 。 tRNA与相应氨基酸的结合是蛋白质合成中的关键步骤，可确保多肽合成的准确性。 蛋白质合成的起始是指在模板mRNA编码区5’端形成核糖体-mRNA-起始tRNA复合物,并将(甲酰)甲硫氨酸放入核糖体P位点。 2. 翻译的起始 mRNA N－甲酰甲硫氨酰－tRNA mRNA上的起始密码子 核糖体小亚基 核糖体大亚基 GTP, Mg2+ 起始因子 翻译的起始需要： 原核生物中30 S小亚基首先与mRNA模板相结合，再与fMet-tRNAfMet结合，最后与50 S大亚基结合。 真核生物中，40 S小亚基首先与Met-tRNAMet相结合，再与模板mRNA结合，最后与60S大亚基结合生成80S·mRNA·Met-tRNAMet起始复合物。 30 S小亚基 模板mRNA fMet-tRNAfmet 3个翻译起始因子，IF-1, IF-2, IF-3 GTP 50 S大亚基 Mg 2+ 细菌的翻译的起始 细菌的翻译的起始 翻译起始复合物的形成: 第一步，30S小亚基与翻译起始因子IF-1，IF-3结合，通过SD序列与mRNA模板相结合。 第二步，fMet-tRNAfMet在IF-2的协同下进入小亚基的P位，tRNA上的反密码子与mRNA上的起始密码子配对。 第三步，带有tRNA、mRNA、三个翻译起始因子的小亚基复合物与50S大亚基结合，释放翻译起始因子。 细菌mRNA分子上往往存在一个与16S rRNA3’末端相互补的SD序列。 各种mRNA的核糖体结合位点中能与16 S rRNA配对的核苷酸数目及这些核苷酸到起始密码子之间的距离是不一样的，反应了起始信号的不均一性。 真核生物蛋白质生物合成的起始有其特点： 核糖体较大， 有较多的起始因子， mRNA具有m7GpppNp帽子结构， mRNA分子5’ 端的“帽子”和3’ 端的多聚A都参与形成翻译起始复合物， Met-tRNAMet不甲酰化， 40 S亚基对mRNA起始密码子的识别经过扫描