国际协调会非灭菌产品微生物检查ICH(11版)摘要.doc

非灭菌产品微生物检查：微生物计数法（ICH） 概述 本检查法可用于好氧的嗜温细菌和真菌的计数。 当本检查法用于确定非规定灭菌制剂及其原、辅料是否符合相应的微生物限度标准时，按下列规定进行检验，包括其取样量和结果判断等。 本检查法不适用于以活菌作为活性成分的制剂的微生物限度检查。 本检查法可采用替代的微生物计数方法，包括自动测定方法，但必须验证替代方法优于或与药典方法相当。 一般程序 本检查应在严格避免外来微生物污染供试品的实验条件下进行，防止微生物污染的措施不得影响供试品中污染微生物的检出 如果供试品具有抗菌活性，应尽可能去除或中和。供试品检查时，如果使用了灭活剂，应对其有效性及对微生物的无毒性进行验证。 如果在供试液制备时使用了表面活性剂，应验证其对微生物无毒性及与灭活剂的相容性。 计数方法 检查时可采用薄膜过滤法或下列平板计数法中的一种。最大可能数法（Most-Probabl -Number, MPN）用于微生物计数其精确度较低，但当供试品的微生物污染程度极低时，MPN法可能是最适宜的方法。 检查时根据供试品的特性和其微生物限度标准选择计数方法。该方法应满足所用的供试品检验量足以符合试验结果的判断。供试品计数方法的适用性必须确定。 培养基促生长试验验和计数方法适用性确定试验 总则 供试品中污染的微生物计数方法的适用性应进行确认。若检验程序或供试品发生变化可能影响检验结果时，计数方法的适用性应重新进行确认。 菌液制备 试验菌液可用标准稳定的菌悬液（商品化）或按下列规定程序制备。试验菌应采用适宜的保存技术保存，试验所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的菌种为第0代）。各试验菌株的培养及接种量见表1。 使用pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或者pH7.2磷酸盐缓冲液制备菌悬液，黑曲霉孢子悬液可用含0.05％（v/v）聚山梨酯80的缓冲液。菌悬液应在2小时内使用，若保存在2～8℃的菌悬液可以在24小时内使用。相对体积的黑曲霉和枯草芽孢杆菌的稳定孢子悬液可替代新鲜的孢子悬液，稳定孢子悬液可保存在2～8℃，并在验证过的贮存期内使用。 表1 实验用菌液的制备和使用 培养基促生长实验 计数方法适用性实验 实验菌株 菌液制备 需氧菌总数测定 霉菌及酵母菌总数测定 需氧菌总数测定 霉菌及酵母菌总数测定 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)〔CMCC(B)26 003〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)〔CMCC(B)10104〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)〔CMCC（B）63501〕 胰酪胨大豆琼脂或胰酪胨大豆肉汤，30～35℃培养18～24小时 胰酪胨大豆琼脂和胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 胰酪胨大豆琼脂/MPN胰酪胨大豆肉汤 ≤100cfu 30～35℃，≤3天 白色念珠菌(Candida albicans)〔CMCC(F)98001〕 沙氏葡萄糖琼脂或沙氏葡萄糖肉汤，20～25℃培养2～3天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃， ≤5天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 不采用MPN法 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃， ≤5天 黑曲霉(Aspergillus niger)〔CMCC(F)98 003〕 沙氏葡萄糖琼脂或马铃薯葡萄糖琼脂，20～25℃培养5～7天，或直到大量孢子产生 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃， ≤5天 胰酪胨大豆琼脂 ≤100cfu 30～35℃，≤5天 不采用MPN法 沙氏葡萄糖琼脂 ≤100cfu 20～25℃， ≤5天 阴性对照试验 为确认实验条件是否符合要求，应设立阴性对照组，以稀释剂代替供试品， 阴性对照组应无菌生长。 培养基促生长实验 每批成品培养基、由脱水培养基或按培养基处方配制的培养基应进行培养基促生长试验。 接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至胰酪胨大豆肉汤管或胰酪胨大豆琼脂平板，每一批培养基分别制备一管/皿；接种如表1所示的少量微生物（≤100cfu）至沙氏