第2章蛋白质的合成转运加工与修饰deflate.ppt

第二章 蛋白质的合成、转运、加工与修饰 第一节 蛋白质的合成 转录：以基因的DNA链为模板，以NTP为原料，在RNA聚合酶的作用下，按照A～U和G～C的碱基配对原则生成mRNA、tRNA和rRNA的过程。 mRNA是指导蛋白质合成的直接模板。 基因表达的最终产物是蛋白质、tRNA和rRNA。 一、信使RNA（messenger RNA，mRNA） mRNA的概念首先从理论上提出来，然后再用实验给予证实。 Jacob和Monod（1961）提出mRNA的假设：有一种中间物质传递DNA上的信息。他们对这种中间物质的性质做了如下的预言： 1. 信使是一种多核苷酸。 2. 信使的碱基组成应与相应的DNA的碱基组成相一致。 3. 信使的长度应是不同的。 4. 在多肽合成时，信使应与核糖体做短暂的结合。 5. 信使的半衰期很短，所以它的合成速度应该是很快的。 Brenner等用实验证实：用噬菌体T2感染大肠杆菌后，几乎所有在细胞内合成的蛋白质都不再是细胞本身的蛋白质，而是噬菌体所编码的蛋白质；大肠杆菌内出现了少量半衰期很短的新类型RNA，其代谢速度极快，它们的碱基组成与噬菌体DNA是一致的。 Spiegelman用分子杂交技术证明：经噬菌体感染后新合成的RNA可以与噬菌体DNA相杂交。 顺反子：编码一种多肽链并连同起始信号和终止信号在内的DNA区段。 单顺反子mRNA：编码一种多肽链的mRNA分子。 多顺反子mRNA：编码数种不同多肽链的同一条mRNA分子。多见于原核生物。 反义链/（-）链：双链DNA分子中被转录成RNA转录本的链。 正义链/（+）链 SD序列/核糖体结合位点（ribosomal binding site，RBS）：原核细胞mRNA的翻译起始密码子AUG的上游相距8～13个核苷酸处有一段由4～6个核苷酸组成的富含嘌呤的序列，以5’-AGGA-3’为核心，它与核糖体小亚基上的16S-rRNA的近3’末端处的一段短序列互补。 Kozak序列：a favorable context for efficient eukaryotic translation initiation（PuNNATGPu）。（S） 典型的Poly(A)加尾信号：AATAAA。（S） cDNA末端快速扩增法（rapid amplification of cDNA ends， RACE）（S） 61个密码分别代表各种氨基酸（amino acid，aa）。一种aa少的只有1个密码（色氨酸和蛋氨酸），多的可有6个，但以2个和4个居多。 终止密码子（terminator codon）：UAA（赭石，ochre）、UGA（蛋白石，opal）和UAG（琥珀，amber）。 起始密码子（initiator codon）：AUG（91％）/GUG（8％）。 遗传密码的特点 1. 连续性（commaless）。三联体密码是不间断的。mRNA链上碱基的插入或缺失可造成框移（frame shift），使下游翻译出的氨基酸完全改变。 2. 通用性（universal）。从最简单的生物一直到人类，在蛋白质的生物合成中都使用同一套遗传密码。哺乳动物线粒体的蛋白质合成体系中有例外！ 3. 简并性（degeneracy)。有两个以上密码子的氨基酸，三联体密码上第一、二位碱基大多是相同的，只有第三位不同。密码子上第三位碱基的变化往往不会影响原有氨基酸的翻译。（密码子的“偏爱性”） 4. 摆动性（wobble）。翻译过程氨基酸的正确加入，需靠mRNA上的密码子与tRNA上的反密码子相互以碱基配对辨认。密码子和反密码子配对，有时会出现不遵从碱基互补配对的规律，这一现象更常见于密码子的第三位碱基与反密码子的第一位碱基之间，两者虽不严格互补，也能相互辨认（表2-2）。 5. 不重叠性（non-overlapping）。在绝大多数生物细胞中基因的读码规则是不重叠的。例外：少数大肠杆菌噬菌体（如R17、QB等）的RNA基因组中，部分基因的遗传密码是重叠的。 三、核糖体------蛋白质合成的场所 核糖体（ribosome）/核糖核酸蛋白体：一种非膜性细胞器，由核糖核酸和蛋白质组成。是细胞合成蛋白质的重要场所。它是一种葫芦形的小体，由大小两个亚基组成。在大小亚基的结合面上有一条隧道，是mRNA穿过的通道。在大亚基的中央有一条中央管，是新合成的多肽链释放的通道。 核糖体的存在形式 1. 核糖体单体：核糖体以单体形式存在。 2. 多聚核糖体：核糖体单体由mRNA串联在一起，是合成蛋白质的功能单位。 1. 游离核糖体（free ribosome）：合成结构蛋白质/内泌性蛋白质（endogenous protein），指用于细胞本身或参与组成细胞自身结构的蛋白质。 2. 结合核糖体（fixed rib