第7章__色谱分离技术.ppt

一、色谱分离技术的概念 色谱（chromatography）分离技术是一类分离方法的总称，又称色谱法、层析法、层离法等。它是利用不同组分在固定相和流动相中的物理化学性质的差别，使各组分在两相中以不同的速率移动而进一步分离的技术。 在色谱法中，表面积较大的固体或附着在固体上且不运动的液体，静止不动的一相（称为固定相 ；自上而下运动的一相（一般是气体或液体）称为流动相 。 根据分离时一次进样量的多少，色谱分离的规模可分为色谱分析规模(小于10mg)、半制备(10~50mg)、制备规模(0.1~10g)和工业生产规模(10g)。色谱分离的规模小，但产值高。 三、色谱法的分类 超临界流体色谱—流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体 —固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄层色谱 色谱法的缺点是处理量小、操作周期长、不能连续操作。 吸附色谱法 吸附色谱法(adsorption chromatography，AC)是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的方法。吸附色谱的固定相为固体吸附剂，如有较强极性硅胶、中等极性氧化铝、非极性炭及特殊作用的分子筛等。 吸附色谱是靠溶质与吸附剂之间的分子吸附力的差异而分离的方法。吸附力主要是范德华力，有时也可能形成氢键或化学键。吸附法的关键是选择吸附剂和展开剂。 下列三个化合物用硅胶吸附色谱分离，以石油醚-乙酸乙酯（95：5）洗脱，判断三者流出色谱柱先后顺序。 ?  A B C 由先到后： C→B→A 平衡系数（分配系数、吸附系数、选择性系数） K= cs/cm cs—固定相中的浓度； cm—流动相中的浓度 阻滞因数（比移值） 阻滞因数 ①0≤Rf≤1 Rf越大，溶质随流动相移动快，被洗脱速率也就越快。 ②当Rf=1，此种溶质不溶于固定相，随流动相以同样的速率移动。 ③当Rf=0，此种溶质不溶于流动相，而被吸附在固定相上。 2.吸附剂与展开剂 薄层色谱法选择的主要吸附剂为氧化铝、硅胶和聚酰胺。色谱用的吸附剂要求一定的形状与粒度范围，不同吸附剂用于分离不同类型的化合物。吸附剂还必须具有一定的活度，活度太高或过低都不能使混合物各组分得到有效的分离。 展开剂 在吸附色谱中，组分的展开过程涉及吸附剂、被分离化合物和溶剂三种之间的相互竞争。其基本原则主要有两个：①展开剂对被分离组分有一定的解吸能力，但又不能太大。②展开剂应该对被分离的物质有一定的溶解度。 展开剂 常用溶剂极性次序为：己烷环己烷四氯化碳甲苯苯氯仿乙醚乙酸乙酯丙酮正丙醇乙醇甲醇水冰醋酸 一般地说，所选的吸附剂应有最大的比表面积和足够的吸附能力，它对欲分离的不同物质应该有不同的解吸能力；与洗脱剂、溶剂及样品组分不会发生化学反应；还要求所选的吸附剂颗粒均匀，在操作过程中不会破裂。 洗脱剂的选择 原则上要求所选的洗脱剂纯度合格，与样品和吸附剂不起化学反应，对样品的溶解度大，粘度小，容易流动，容易与洗脱的组分分开。 洗脱剂的选择 常用的洗脱剂有饱和的碳氢化合物、醇、酚、酮、醚、卤代烷、有机酸等。选择吸附剂时，可根据样品的溶解度、吸附剂的种类、溶剂极性等方面考虑，极性大的洗脱能力大，因此可先用极性小的作洗脱剂，使组分容易被吸附，然后换用极性大的溶剂作洗脱剂，使组分容易从吸附柱中洗出。 3.影响吸附分离的因素 ①和功能基极性有关。极性增加的顺序：烷烃、不饱和烃、醚、酯、酮、醛、醇、酚和羧酸，同一类化合物极性基团越多，极性越大。 二、吸附色谱分离操作及其设备 1.薄层吸附色谱分离操作及设备 ①干法铺板(软板制备) 多用于氧化铝薄层板的制备。在一块边缘整齐的玻璃板上，铺上适量的氧化铝，取一合适物品顶住玻璃板右端。两手紧握铺板玻璃棒的边缘，按箭头方向轻轻拉过，一块边缘整齐、薄厚均匀的氧化铝薄层即成。 可用于硅胶、聚酰胺、氧化铝等薄层板的制备，但最常用的是硅胶硬板。为使制成的硅胶板坚硬，要加入黏合剂，用硫酸钙为粘合剂铺成的板称为硅胶G板，用羧甲基纤维素钠作黏合剂铺成的板为硅胶-CMC板。 2) 点样 用一根玻璃毛细管或点样器，吸取样品溶液，在距薄层一端约2cm的起始线上点样，每点间距约2cm，样品点直径一般小于0.5cm。注意点样量要适中，太少时，某些成分不能被检出；太多时容易产生拖尾现象，即每个斑点都拉得很长，互相重叠，不能分开。 3）展开 展开操作需要在密闭的容器中进行。配好展开剂，将展开剂（一般2～10mL）倒入层析缸。放置一定时间，待层析缸被展开剂饱和后，再迅速将薄层板放入，密闭，展开即开始，这样可防止边缘效应产生。另外，注意在薄板放入层析缸时，切勿使溶剂浸没样品点。当溶剂移动到接近薄