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* 第二章蛋白质制备 蛋白质分离纯化的一般程序 蛋白质的粗分离 蛋白质的层析分离 蛋白质的电泳分离 蛋白质的结晶 内 容 提 要 （第二讲） （三）膜蛋白的释放 膜蛋白 外周蛋白 固有蛋白 去污剂 阴离子去污剂 （脱氧胆酸盐） 阳离子去污剂 （溴化十二烷基三甲胺） 两性离子去污剂 非离子型去污剂 （二甲基十二烷基甘氨酸） （TritonX-100） 增溶作用：抽提固有蛋白时，既要削弱它与膜脂的疏水性结合，又要使它仍保持疏水基暴露在外的天然状态。 比较理想的增溶剂是去污剂。 3.在低温（-20℃）下，用丙酮处理组织和细菌。 （四）胞外酶的分离 浓缩的方法是超滤。 二、蛋白质的浓缩和脱盐 1.除盐方法： ⑴透析法 ⑵纤维过滤透析法 ⑶分子筛层析法 释放膜蛋白的方法： 1.用磷酸脂酶A消化膜脂肪。 2.在高pH和较高温度下进行超声作用。 容易 稍难 稍难 5h以上 0.5h 数小时 少量或数十毫升 大量样品 少量或数十毫克 透析 纤维过滤透析 分子筛层析 操作难易 操作时间 处理量 方法 蛋白质的脱盐方法比较 2.浓缩的方法 ⑴沉淀法 ⑵吸附到离子交换剂上 ⑶干胶吸附法 ⑷渗透浓缩法 A B 抽真空 超滤液 N2压力 膜 多孔 支板 磁力搅拌器 超滤器 ⑸超滤浓缩法 利用压力或离 心力强行使水 和小分子杂质 通过超滤膜 (一种半透膜) 除去，而蛋白 质留在膜上， 称为超过滤。