免疫学检测上课_培训课件.ppt

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灵敏度达pg水平。常用于微量物质测定,如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgE等。 放射免疫检测法(RIA) 竞争法 能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量,常用于检测多种病毒的抗体或抗原,如抗HIV抗体的检测。 免疫印迹法 二、淋巴细胞的测定 (一)淋巴细胞的分离与类型鉴定 1、淋巴细胞的分离:外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法 白膜层 单核细胞 淋巴细胞 B T 吸附分离 过尼龙毛柱分离 (1)间接免疫荧光法:鉴定细胞的群、亚群。 用CD3、CD4、CD8单克隆抗体检测患者外周血T细胞表面相应抗原 CD3+ ——T细胞,计算T细胞总数。 CD4+ —— CD4+T细胞,计算CD4+T细胞数。 CD8+——CD8+ T细胞,计算 CD8+亚群T细胞数 计算CD4+ / CD8+比例 正常人PMB中T细胞占65~75% CD4+ / CD8+约为1.5~2 2、淋巴细胞的类型鉴定:淋巴细胞表面标记检测、 记数 用mIgM、mIgD单克隆抗体检测患者外周血B细胞表面相应的抗原已检测B细胞的数量 正常人外周血中SmIg+ 细胞占8~12% (2)流式细胞术(flow cytometry) (二)淋巴细胞功能测定 1、T细胞功能测定 (1)T细胞增殖试验(淋转):丝裂原、抗CD3单克隆抗体 等能非特异地激活T细胞,使之发生转化增殖,计算淋巴母细胞转化率(正常值65~80%) 。 ①形态学观察法 ②3H-TdR渗入法:用液体闪烁仪测定样品的β射线放射活性 ③MTT法 (2)淋巴细胞介导的细胞毒试验(LMC) ——检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能 (2)抗体形成细胞测定—— 溶血空斑试验 (hemolytic forming cell assay,HFC)计算HFU/ml 2、B细胞功能测定 (1)B细胞增殖试验:LPS、SPA刺激,检查抗体形成细胞 的数目 可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群,监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法:ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法 ③分子生物学方法,如聚合酶链反应(PCR)法等 3、细胞因子检测 4、体内免疫细胞功能测定:皮肤试验 (1)迟发型超敏反应:旧结核菌素试验( OT试验 ) 皮试(+)——有一定的细胞免疫能力 皮试(—)——细胞免疫功能缺损 (2)速发型超敏反应:青霉素皮试、 异种血清皮试 一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法 三、主动免疫治疗(active immunotherapy)和被动免疫治疗(passive immunotherapy) 二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗 (一)免疫增强剂 化学制剂:1、左旋咪唑 2、西咪替丁 微生物制剂:1、卡介苗(BCG) 2、短小棒状杆菌 3、微生物提取物 中药制剂: 黄芪、人参、 枸杞子等 免疫增强剂与免疫抑制剂 免疫因子:1、转移因子 2、免疫核糖核酸 3、胸腺肽 适应症:免疫功能低下的患者 (1)恶性肿瘤 (2)免疫缺陷病 (3)传染病 副作用:较轻 二、 免疫抑制剂 化学制剂 1、烷化剂:环磷酰胺 2、抗代谢药:激素:糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A:对T,尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506:其作用强于环孢素A10-100倍,且与环孢素A有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙 免疫抑制药物的适应症和副作用 适应症:免疫功能过高引起机体损害的患者 1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病:激素 3、自身免疫病:激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症:激素 副作用:明显 ,主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 其抑制作用是非特异性的,长期应

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