免疫学检测上课_培训课件.ppt

灵敏度达pg水平。常用于微量物质测定，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素、吗啡、地高辛等药物以及IgE等。 放射免疫检测法（RIA） 竞争法 能分离分子大小不同的蛋白质并确定其分子量，常用于检测多种病毒的抗体或抗原，如抗HIV抗体的检测。 免疫印迹法 二、淋巴细胞的测定 （一）淋巴细胞的分离与类型鉴定 1、淋巴细胞的分离：外周血葡聚糖-泛影葡胺密度梯度离心法 白膜层 单核细胞 淋巴细胞 B T 吸附分离 过尼龙毛柱分离 （1）间接免疫荧光法：鉴定细胞的群、亚群。 用CD3、CD4、CD8单克隆抗体检测患者外周血T细胞表面相应抗原 CD3+ ——T细胞，计算T细胞总数。 CD4+ —— CD4+T细胞，计算CD4+T细胞数。 CD8+——CD8+ T细胞，计算 CD8+亚群T细胞数 计算CD4+ / CD8+比例 正常人PMB中T细胞占65~75% CD4+ / CD8+约为1.5~2 2、淋巴细胞的类型鉴定：淋巴细胞表面标记检测、 记数 用mIgM、mIgD单克隆抗体检测患者外周血B细胞表面相应的抗原已检测B细胞的数量 正常人外周血中SmIg+ 细胞占8~12% （2）流式细胞术（flow cytometry） （二）淋巴细胞功能测定 1、T细胞功能测定 （1）T细胞增殖试验（淋转）：丝裂原、抗CD3单克隆抗体 等能非特异地激活T细胞，使之发生转化增殖，计算淋巴母细胞转化率（正常值65~80%） 。 ①形态学观察法 ②3H-TdR渗入法：用液体闪烁仪测定样品的β射线放射活性 ③MTT法 （2）淋巴细胞介导的细胞毒试验（LMC） ——检测CTL、NK、 LAK、TIL细胞杀伤靶细胞的功能 （2）抗体形成细胞测定—— 溶血空斑试验 （hemolytic forming cell assay，HFC）计算HFU/ml 2、B细胞功能测定 （1）B细胞增殖试验：LPS、SPA刺激，检查抗体形成细胞 的数目 可用于鉴定分离的淋巴细胞亚群，监测某些疾病状态的细胞免疫功能。IL-2、IL-2R、rIFN 、TNF等检测。 ①免疫学方法：ELISA、RIA等。 ②细胞生物学方法 ③分子生物学方法，如聚合酶链反应（PCR）法等 3、细胞因子检测 4、体内免疫细胞功能测定：皮肤试验 （1）迟发型超敏反应：旧结核菌素试验（ OT试验 ） 皮试（+）——有一定的细胞免疫能力 皮试（—）——细胞免疫功能缺损 （2）速发型超敏反应：青霉素皮试、 异种血清皮试 一、免疫增强疗法和免疫抑制疗法 三、主动免疫治疗（active immunotherapy）和被动免疫治疗（passive immunotherapy） 二、特异性免疫治疗和非特异性免疫治疗 （一）免疫增强剂 化学制剂：1、左旋咪唑 2、西咪替丁 微生物制剂：1、卡介苗（BCG） 2、短小棒状杆菌 3、微生物提取物 中药制剂： 黄芪、人参、 枸杞子等 免疫增强剂与免疫抑制剂 免疫因子：1、转移因子 2、免疫核糖核酸 3、胸腺肽 适应症：免疫功能低下的患者 （1）恶性肿瘤 （2）免疫缺陷病 （3）传染病 副作用：较轻 二、 免疫抑制剂 化学制剂 1、烷化剂：环磷酰胺 2、抗代谢药：激素：糖皮质激素 真菌代谢产物 1、 环孢素A：对T，尤其是TH有较好的选择性抑制作用 2、FK-506：其作用强于环孢素A10-100倍，且与环孢素A有明显的协同作用。 中药及其有效成分 雷公藤多甙 免疫抑制药物的适应症和副作用 适应症：免疫功能过高引起机体损害的患者 1、抗移植排斥 2、超敏反应性疾病：激素 3、自身免疫病：激素、雷公藤多甙 4、感染性炎症：激素 副作用：明显 ，主要是骨髓抑制、肝肾毒性等 其抑制作用是非特异性的，长期应