生物化学酶促反应动力学2讲课.pptVIP

pH对酶活性的影响 实验原理 只有当酶蛋白处于一定的构象及电荷状态，才有利于酶和底物的结合和催化，使酶促反应最强，因此酶反应介质的pH可影响酶分子。在某一pH时，酶的催化活性达到最大值，该pH称为酶的最适pH。碱性磷酸酶的最适pH为8~12。 本实验采用磷酸苯二钠法，在不同的pH值的甘氨酸缓冲液条件下，测定其活性，从而确定其最适pH。 以磷酸苯二钠为底物，被碱性磷酸酶水解后则产生游离酚和磷酸盐。酚在碱性溶液中与氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化可产生红色的醌类衍生物。根据红色深浅就可测出酶的活性，从而得出酶的最适pH。 反应式如下： 实验材料 甘氨酸缓冲液、0.04mol/L底物液、酶液、0.1mol/L pH10碳酸盐缓冲液、0.5%铁氰化钾液、酚标准液、 pH8.8Tris-乙酸缓冲液、碱液、0.3% 4-氨基安替比林液、0.04mol/L Na2HPO4 实验方法 1.取试管6支 ，编号，表操作 2.加入酶液后，立即计时，混匀后，在37℃水浴中准确保温5min。 3. 保温后，各管中立即加入碱性液1.0ml终止反应。 4.各管中分别加入0.3%4-氨基安替比林液1.0ml及0.5%铁氰化钾2.0ml充分混匀，使呈色完全。室温放置10min，以6号管为空白,不比色,用+来表示颜色的深浅. 温度对酶活性的影响 实验原理 温度对酶活性