第八讲皂苷分析..docVIP

第八讲 皂苷分析 结构与分析 ■ 结构与分类 ·皂苷的含义及分布★ ·皂苷的分类★★★ 皂苷根据水解后苷元的结构类型分为两大类 甾体皂苷 三萜皂苷 皂甙元、糖、糖醛酸或有机酸 五环三萜 二、分布 ■ 甾体皂苷 菝契，穿山龙，土茯苓，麦冬 ■ 三萜皂苷 人参，三七，甘草，柴胡，黄芪，桔梗，地榆 三、性质 ■ 性状 ■ 溶解度 溶于水、醇，不溶于非极性有机溶剂 ■ 水解性 较其他苷难，可酸水解或酶水解 ■ 酸碱性 甾体皂甙呈中性 三萜皂甙显弱酸性 鉴别方法 ■ 泡沫反应 中性皂甙碱性条件下的泡沫较酸性条件稳定 酸性皂甙在酸碱性条件下无差异 ■ 溶血反应 ■ 沉淀反应 重金属 中性盐：硫酸铵、醋酸铅-----酸性皂甙 碱性盐：氢氧化钡、碱式醋酸铅-----中性皂甙 ■ 显色反应 硫酸、硝酸、醋酐--硫酸、醋酸--乙酰氯 色谱法 ■ TLC 极性基团越多，展开剂极性越强 含量测定 ■ 比色法 ■ 紫外分光光度法 ■ 薄层色谱扫描法 ■ 高效液相色谱法 HPLC-ELSD法测定黄芪中黄芪甲苷的含量 1.药材来源：本品为豆科植物蒙古黄芪 Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪A. membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根。 2. 主要化学成分：含皂苷、黄酮及多糖成分等。皂苷类成分包括黄芪皂苷I~VIII及大豆皂 苷I; 黄酮类成分有芒柄花素、毛蕊异黄酮及其苷类等。 ①色谱条件 ■ 岛津LC-10A高效液相色谱仪 ■ Alltech ELSD 500蒸发激光散射检测器 ■ 色谱柱为大连依利特ODS柱(4.6mm×250mm)； ■ 流动相: 乙腈－水(36: 64)，流速为 0.8ml/min, ■ 漂移管温度：100℃，氮气流速： 2.74ml/min； ■ 进样量20μl。 ②供试样品的制备 ■ 药材粉碎，过40目筛，干燥至恒重，称取约 1.5g，精密称定，置索氏提取器中加甲醇 80ml，回流提取5h，回收甲醇，残渣加水10ml 超声溶解后，转移至分液漏斗中，以水饱和的 正丁醇萃取4次，每次20ml，合并正丁醇萃取 液，用氨试液（40ml浓氨水加水配成100ml）洗 涤2次，每次20ml，弃去碱水层，将正丁醇层减 压回收至干，用甲醇溶解并定容至5.0ml，摇匀 备用。 ③标准曲线的制备 ■ 精密称取黄芪甲苷对照品加甲醇制成1.008mg/ml 的黄芪甲苷对照品溶液，精密吸取上述对照品溶 液100, 200, 300, 400, 500, 600μl，置于1ml 的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。进样 20μl，以进样量为横坐标，峰面积的常用对数 值为纵坐标绘制标准曲线。 ■ 回归方程为：Y=1.6236X+9.9065 ■ 相关系数 r=0.9997 ■ 范围 2.016-12.096μg ■ 样品测定：取不同来源的3批黄芪药材各约1.5g，精密称定，按“供试样品的制备” 项下处理并测定，结果分别为0.1689%, 0.1090%,0.1206%。 比色法测定黄芪 ■ 取供试品及黄芪甲苷对照品溶液适量,加入新鲜配 制的5 %香草醛冰醋酸液- 高氯酸(1∶4) 1mL ,85 ℃水浴20 min ,取出,冰浴5min ,加入冰醋酸5 mL ,摇匀,放置2 h ,以试剂作空白,分别在400～ 800 nm 范围内测定吸收曲线。 ■ 黄芪甲苷有2 个吸收峰,分别为464 nm 和571nm ■ 空白试剂在460 nm 处有干扰,故选择571 nm为测 定波长。 复习思考题 ■ 用比色法测定中药中总皂苷的含量实验 时，如何提高测定结果的准确性？ 示例1：三七 Radix Notoginseng （见生药学） 【理化鉴定】 1、泡沫：取粉末0.5g，加水5ml，温浸30分钟（或冷浸振摇１小时）,滤过。取滤液适量，置试管中，用力振摇1分钟，产生持久性泡沫。 2、颜色、荧光：取本品粉末2g，加甲醇15ml，温浸30分钟（或冷浸1小时）。取滤液1ml，蒸干，加醋酐1ml与硫酸1-2滴，显黄色，渐变为红色、紫色、 青色、污绿色；另取滤液数滴点于滤纸上，干后置紫外灯（365nm）下观察，显淡蓝色荧光，滴加硼酸饱和的丙酮溶液与1％枸橼酸溶液各１滴，干后，置紫外光灯下，有强烈的黄绿色荧光。 3、薄层色谱：取本品粉末0.5g，加水约5滴，搅匀，再加以水饱和的正丁醇５ml，密塞，振摇约10分钟，放置2小时，离心，取上清液，加以正丁醇饱和的水3倍量，摇匀，放置使分层（必要时离心）。取正丁醇层，置蒸发皿中，蒸干，残渣加甲醇１m