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第二节 酶促反应动力学 酶促反应动力学： 是研究酶促反应的速率以及影响此速率的各种因素的科学。 一、底物浓度[S]对酶反应速率的影响 （一）中间产物学说（米式学说） 中间产物学说 （二）米式公式 （三） 米式常数的意义 Km意义： （四）米氏常数的求法 二、酶浓度对酶反应速率的影响 V∝ [E] 三、pH对酶反应速度的影响 pH-酶反应速率曲线与最适pH（optimum pH） 四、温度对酶反应速度的影响 温度-酶反应速率曲线与最适温度（optimum temperature） 五、激活剂对酶反应速度的影响 某些还原剂：GSH、Cys、Vc 金属螯合剂 六、抑制剂对酶反应速度的影响 （一）不可逆的抑制作用（irreversible inhibition） （二）可逆的抑制作用（reversible inhibition） ?竞争性抑制（competitive inhibition） ?非竞争抑制（noncompetitive inhibition） ?反竞争抑制（uncompetitive inhibition） 1.竞争性抑制 2.非竞争性抑制 （三）研究酶抑制作用的意义 Fig.2-13 Lineweaver-Burk plot of competitive inhibition. Vmax Km V 1 = ) [ I ] [ Ki ] (1+ + Vmax 1 [S] 1 1/[S] [ I ] 1/v [ I ] [ Ki ] Km ( 1+ ) -1 -1/Km No inhibitor With competitive inhibitor 含义： 酶可与抑制剂和底物同时结合，形成酶-底物-抑制剂三元复合物（ESI）， ESI不能进一步分解为产物，从而使酶活性下降。 这类抑制剂通常与酶活性部位以外的基团相结合。 例如：亮氨酸是精氨酸酶的非竞争性抑制剂。 * 底物浓度[S] 酶浓度[E] 温度、pH 激活剂、抑制剂 一级反应 混合级反应 零级反应 Fig.2-4 Effect of substrate concentration on the initial velocity of an enzyme-catalyzed reaction. 在底物浓度低时，酶只有一部分与底物结合生成ES，若增加底物浓度，则有更多的ES生成，反应速度随之增加。 当底物浓度很大时，酶全部与底物结合生成ES，若继续增加底物浓度，无更多的ES生成，酶反应速度与底物浓度无关，反应速度达到最大。 S + E ES E + P k1 k2 k3 k4 1913，Michaelis Menten提出 1925，Briggs Haldane修正 Km ：反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。单位 mol/L或 mmol/L。 Fig.2-5 Substrate saturation curve for an enzyme-catalyzed reaction. ? Vmax 是酶的一个特征常数 (一般介于10-6~10-1mol/L) Km可表示酶对底物的亲和力，Km小表示酶对底物的亲和力大。 Km值可以帮助推断某一代谢反应的方向和途径。 返回 某反应系列： 酶1 酶2 酶3 酶1: 底物 A Km 10-2mol/L 酶2: 底物 B Km 10-3mol/L 酶3: 底物C Km 10-4mol/L B C D A 细胞内A, B, C浓度均接近10-4mol/L 推知限速步骤是A→B 丙酮酸 乳酸脱氢酶 丙酮酸脱氢酶 丙酮酸脱羧酶 1.7×10-5 1.3×10-3 1.0×10-3 乳酸 乙酰CoA 乙醛 Fig. 2-6 The Lineweaver -Burk double-reciprocal plot 1. 双倒数作图法（Lineweaver-Burk plot） v = - Km v [S] + Vmax Fig. 2-7 The Eadie- Hofstee plot. Slope = -Km Vmax Vmax / Km 2. v- [S] v 作图法（Eadie-Hofstee plot） Fig.2-8 The Hanes-wolf plot. 3. The Hanes-wolf 作图法 Fig. 2-9 Effect of enzyme concentration on the velocity of an enzyme-catalyzed reaction. v pH optimum pH Fig. 2-10 The effect of pH on enzyme activity.