三.同工酶的分型原理和方法.pptVIP

许冰莹, Tel:座机电话号码；1座机电话号码05Email:bingying_xu@126.com 昆明医科大学法医学院 第十一章 酶型 教学内容和目的要求： ＊ 1.熟悉红细胞酶型的概念。 ＊ 2.熟悉EAP的表型与基因型关系，以及各自遗传规律。3.了解EAP的等位基因结构与命名。 学时安排：课堂讲授1学时。 第一节 概 述 第四节 红细胞酸性磷酸酶（EAP） 第一节 概 述 ＊一.酶、同工酶和酶型的概念 二.同工酶的分类及命名 ＊三.同工酶的分型的原理和方法＊一.酶、同工酶和酶型的概念concept of enzyme 、Isozymes and enzyme type 1.酶enzyme 具有催化活性的蛋白质。 人类几乎所有的生命活动，都是通过一系列复杂的生 物化学反应来完成—酶的催化作用。 酶—生物催化剂＊ 2.同工酶isoenzymes 指能催化相同的生物化学反应， 但蛋白质 分子结构不同的一类酶。 同工酶： 活性中心:结构相同非催化部位: 结构差异 ＊ 3.多态性同工酶 polymorphic enzyme 指在同工酶中由遗传基因决定，在不同个体之 间表现出酶蛋白分子一级结构差异， 并据此 可将人群分为若干类型的同工酶。 酶型就是一类多态性同工酶。 已经发现人类红细胞中有20余种多态性同工酶。 二. 同工酶的分类（The classification of isozyme） §根据同工酶编码基因的特点：三类 1. 复基因座位同工酶（multiple gene loci） 2. 复等位基因同工酶（multiple allele） 3. 遗传变异体同工酶（genetic variants） 1.复基因座位同工酶（multiple gene loci） 又称遗传独立同工酶，由几个不同基因座位的基因 编码，然后编码产物经过组装成为完整的酶蛋白分 子。这类同工酶各亚基的一级结构差异很大。 乳酸脱氢酶LDH：H4、H3M1、H2M2、H1M3 和M4 磷酸葡糖变位酶PGM：PGM1，PGM2，PGM3 ＊ 2. 复等位基因同工酶（multiple allele）由同一基因座位上的多个等位基因编码，这些基因一般都表现为显性 基因， 各等位基因编码的蛋白质一级结构不同，具有个体差异，成为个 人识别的基础。法医学应用的多态性同工酶都是复等位基因同工酶。 PGM1: PGM1﹡1 +, PGM1﹡1 – , PGM1﹡2 + ，PGM1﹡2 – 。 4个等位基因，决定10种表型。 3. 遗传变异体同工酶（genetic variants）由单基因座的基因突变产生的同工酶。这类同工 酶的发生是由亲代某一基因发生突变，由突变等位基 因编码的一条特异的多肽链。 葡萄糖-6-磷酸脱氢酶G6PD： 140 多种变异体。三. 同工酶的分型原理和方法（Isozyme typeing principle and method） 原理：利用不同酶分子的电泳特性差异进行检测。Using different enzyme electrophoretic characteristicsdifferences were detected 方法：采用凝胶电泳的方法进行分型和酶谱显示。Using gel electrophoresis method for typing、Enzymespectrum display 三. 同工酶的分型原理和方法（Isozyme typeing principle and method） 1. 电泳分离（区带电泳或等电聚焦电泳） （1）区带电泳Zone electrophoresis： 利用不同酶蛋白分子的大小和所携带电荷数量的 差异，在电泳介质中迁移率不同，而形成清晰的区带。 并利用酶的催化活性，作用于底物，使之显带，根据 电泳谱型进行判型。三. 同工酶的分型原理和方法（Isozyme typeing principle and method） 1. 电泳分离（区带电泳或等电聚焦电泳） （1）区带电泳：电泳过程中，待分离的各组分在支持介 质中被分离成许多条明显的区带—区带电泳。 三. 同工酶的分型原理和方法 （Isozyme typeing principle and method） （2）等电聚焦电泳Isoelectric focusing electrophoresis：根据不同酶蛋白分子的等电点（ PI ）不 同，在pH梯度介质中，酶蛋白分子聚焦在相应 的等电点pH位置上，形成狭窄而清晰的区带,使 不同PI的酶蛋白分子得以分离。 2. 酶谱显示Enzyme spectrum display 酶蛋白分子经电泳分离后，利用酶特异性的催 化