亚铁嗪直接比色法测铁.docVIP

亚铁嗪直接比色法测铁 原理： 血清铁与运铁蛋白结合成复合物，在酸性介质中铁从复合物中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，并与亚铁嗪生成紫红色化合物，在562nm处有吸收峰，可比色测定。 试剂： R1试剂：甘氨酸/盐酸缓冲液（PH2.8）：0.4mol/L甘氨酸溶液58mL、0.4mol/L盐酸溶液42ml和Triton X-100 3ml混合后加入无水亚硫酸钠800mg，使溶解。 R2试剂亚铁嗪显色液：称取亚铁嗪0.6g溶于100ml去离子水中。 铁标准贮存液（1.79mmol/L）：精确称取经室温干燥恒重的硫酸高铁铵[,AR]0.8635g，置于烧杯中，加去离子水50ml，逐滴加入浓硫酸5ml，溶解后移入1L容量瓶中并用去离子水稀释至刻度。置棕色瓶中可长期保持。 铁标准应用液（35.8μmol/L）：在100ml容量瓶中加入铁标准贮存液2ml，加适量去离子水后，再加浓硫酸0.5ml，最后以去离子水稀释至刻度。 操作： 如表： 试剂(ml) 测定管 标准管 空白管 血清 0.45 铁标准应用液 （35.8μmol/L） 0.45 去离子水 0.45 甘氨酸/盐酸缓冲液 1.20 1.20 1.20 混匀，用波长562nm，光径0.5cm，空白调零，读取测定管吸光度，然后再加 亚铁嗪显色液 0.05 0.05 0.05 充分混匀，置室温15分钟或37℃ 10分钟后用同样的条件和方法读取各管吸光度。 计算结果： 测定意义： 铁是人体必需的微量元素，是合成红细胞中血红蛋白的主要原料，存在于正常人体内的铁平均为3~4.5g。全身所有的约70%存在血红蛋白中，少量存在于肌红蛋白中。而各种酶和血浆中运输状态中的铁，仅占全身铁的极小部分。 血清铁增高：(红细胞破坏增多是，如溶血性贫血；(红细胞的再生或成熟屏障，如再生障碍性贫血、巨幼红细胞性贫血；(铝中毒时铁利用率过低；④维生素缺乏引起造血功能减退时。 血清铁降低：(机体摄入不足，如营养不足、胃肠道病变、消化性溃疡、慢性腹泻等；(机体失铁增加，如失血，包括大量和隐性失血，特别是肾炎、肾结核、阴道出血、溃疡病等，泌尿生殖道和胃肠道的出血；(体内铁的需要增加又未及时补充，如妊娠、婴儿生长期等；④体内贮存体释放减少，如急性和慢性感染、尿毒症等均可引起铁释放减少；⑤某些药物治疗，如促肾上腺皮质激素或肾上腺皮质激素、大剂量的阿司匹林、考来烯胺等；⑥生理性降低：妇女在月经期、妊娠期，婴儿在生长期，因体内铁的需要量增加，可使血清铁降低，属于生理现象 物品清单 甘氨酸0.4mol/L 100ml 盐酸0.4mol/L 100ml Triton X-100 3ml 无水亚硫酸钠 2g 亚铁嗪 2g 硫酸高铁铵 2g 去离子水 2L 浓硫酸 50ml 50ml移液管3支 5ml移液管2支 电子天平 滤纸3张 药匙3个 200ml烧杯2个 100ml烧杯1个 1L容量瓶1个 棕色瓶1个 100ml容量瓶1个 玻璃棒1根 紫外可见分光光度计1台 比色皿3个