动物行为生学 实验申请.doc

国家大学生创新性实验计划项目申请书项　目　名　称：三种猪I型干扰素基因的克隆与序列分析 姓名：某某某学院：生 命 科 学 学 院专业：某某某某学号：…………申请理由（包括前期工作基础及项目成员具备的知识、兴趣、已取得的成绩及相关科研经历等） 干扰素(interferon，IFN)是由干扰素诱生剂诱导生物细胞后所产生的一类高活性多功能的糖蛋白。它是由Issaacs等于1957年利用鸡胚绒毛尿囊膜研究流感病毒干扰现象时发现的[1]。干扰素自从被发现以来，由于其广谱抗病毒、抗肿瘤活性及其强大的免疫调节作用而受到研究者们的重视。其中猪干扰素分为I型和II型，其中猪I型干扰素又分为a、B、(I)、6类型，而猪干扰素∞又称为猪干扰素Q 2，I型干扰素具有广谱抗病毒作用。为了研究和开发猪重组干扰素细胞因子类生物治疗制剂来控制猪的病毒性疾病.二、选题依据（包括项目的学术价值、应用价值、国内外研究现状分析，并列出主要参考文献） 干扰素是一类重要的细胞因子，是由生物体细胞受到病毒或其它诱生剂的作用而产生的分泌性糖蛋白，具有抗病毒、抗细胞增殖、免疫调节等多种生物学活性。动物的干扰素在动物疾病的防治方面具有重要作用。它们不仅具有抗病毒、细菌和寄生虫等功能，还具有作为免疫调节剂调节免疫反应、促进增重等功能。根据IFN蛋白质的氨基酸结构、抗原性和细胞来源，可将其分为两类，即I型和II型。哺乳动物I型IFN又包括a、B、(I)、．c、6，前三个由病毒诱导合成；猪怀孕时滋养层细胞分泌的IFN一6为猪所特有，未在其它物种中发现嘲。IFN—a由17个以上不同的基因编码，IFN．B和IFN—Y的基因都只有一个。猪干扰素对生产中多种具重大威胁的病毒传染病，如猪繁殖与呼吸综合征、口蹄疫、猪瘟、猪伪狂犬等均具有很好的抑制和杀灭作用。Chinsan—gar锄等【3]的研究证实口蹄疫病毒对IFN—Q高度敏感，Moraes等‘4]用表达猪IFN一Ⅱ的重组腺病毒和表达FMDv A24 P1蛋白重组腺病毒联合免疫可以使猪体获得保护，抵抗口蹄疫病毒攻击。一系列体外试验表明【5．6】：用IFN—Y或重组IFN—Y处理感染繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的猪巨噬细胞，可抑制PRRSV增殖。猪白细胞干扰素预防乳猪疾病田间试验临床治疗试验发现‘7t8J，用猪自细胞干扰素给7日龄乳猪预防用药，连续注射2天，可减少发病率52。2％，减少死亡率12．9％。发病乳猪临床治愈率96．6％；用猪白细胞干扰素治疗自然发病猪疾病总有效率达95．4％，治愈率94％。目前，由于食品安的原因，许多人用抗病毒药物都已经禁止在动物上使用，如金刚烷胺、病毒唑和利巴韦林等，猪干扰素抗病毒制剂无疑是一个很好的替代品。中国作为为养猪大国，而病毒性疾病是影响养猪业的主要因素，具有良好抗病毒作用的猪干扰素有非常广阔的市场前景。本研究运用RT—PCR技术从长白猪外周血淋巴细胞中成功克隆到了三种猪I型干扰素基因，为进一步研究和开发利用猪干扰素制剂奠定了基础。 参考文献： [1]Isaacs A，Lindenmann J．Virus Interference I．The Inter— feron[J]．Proc R Soc Lond B Bi01 Sci，1957，147(927)：258—267． [2]Domeika K．Porcine i衄unoregulatory cytokines wi th specialreference to their induction by CpG contain—ing DNA[M]．In Department of Veterinary Microbiolo—gy，Section fOr I舳unoiogy．Uppsala：Swedish Universi—ty of Agricultural Sciences．2003 [3]chinsangaram J，Koster Mt Grub眦n M J．Inhibition of L— deleted foot—and—mouth d=【sease virus replication byalpha／beta interferon involves double—stranded NA—dependent protein kinase[J]．J Vir01，200l，75(12)：498—5503． [4]Moraes M P，Chinsangar锄J，Brum M c S，et a1．I啪ediate Drotection of swine from foot—and一∞uth disease：a com— bination of adenoviruses expressing interferon alphaand a foo