化学发光常问题集锦 107问.doc

Beckman Coulter ACCESS( 系列全自动微粒子化学发光 免疫分析系统常见问题及答疑目录 第一部分：化学发光基础知识第1--17问 第二部分：仪器应用部分第18--74问 第三部分：项目应用部分第75—107问第一部分：化学发光基础知识 1 什么是化学发光，与放免、酶免比较有何不同？ 化学发光免疫分析（Chemiluminescence Immunoassay，CLIA）是将化学发光与免疫反应相结合，用于检测微量抗原或抗体的一种新型标记免疫测定技术。 化学发光免疫分析比放射免疫，酶联免疫具有更高灵敏度，具备操作简便、快速的特点，易于标准化操作。且测试中不使用有害的试剂，试剂保存期长，应用于生物学、医学研究和临床实验诊断工作，成为非放射性免疫分析法中最有前途的方法之一。 （1）与放免（RIA）产品比较与放射免疫试剂（RIA）比较，化学发光避免了放射性核素的污染以及对操作人员的伤害，大大缩短了反应时间，同时兼具高灵敏度的优势。（2）与酶免（ELISA）产品比较灵敏度与可测范围远远高于酶免产品，兼具ELISA法简便的操作方法与较短的反应时间。 2 什么是标记免疫技术，它的三大要素是什么？将Ag或Ab用标记物(如荧光素、酶、放射性同位素、化学发光物质等)进行标记，在与标本中的相应Ab或Ag反应后，可以不必测定Ag-Ab复合物本身，而测定复合物中的标记物，通过标记物的放大作用，进一步提高了免疫技术的敏感性。三要素：通常在检测系统中会使用到一种叫标记物（labeling）的物质,常标记在抗体上 通常会有一个分离（separation）的过程在最后读取信号前 需要去仔细关注一下分析的模式（format） 3 标记免疫技术主要有哪几种？ 主要经历了四种标记免疫技术的发展：荧光素(Fluorophores) – FIA 放射性同位素(Radioisotopes) – RIA 酶(Enzymes) – EIA 化学发光物质 - CLIA 4 ACCESS化学发光原理？ 分析方法及过程 ACCESS系统采用磁性微粒作为固相载体，以AMPPD作为发光剂，固相载体的应用扩大了测定的范围。以竞争法、夹心法等免疫测定方法为基础。试剂包装采用特殊的设计，每个试剂包有5个小室分别把不同的试剂分开，减少了交叉污染，保证了检测质量。 ⑴、抗原抗体结合：将包被单克隆抗体的顺磁性微粒和待测标本加入反应管中，标本中的抗原与微粒子表面的抗体结合，再加入碱性磷酸酶标记的抗体，经温育后形成固相包被抗体-抗原-酶标记抗体复合物。 ⑵、洗涤、分离：在电磁场中进行3次洗涤，很快将未结合的多余抗原和酶标记抗体洗去。 ⑶、加入底物AMPPD发光剂：AMPPD被结合在磁性粒子表面的碱性磷酸酶的催化下迅速去磷酸基因，生成不稳定的中介体 AMPD。AMPD很快分解，从高能激发态回到低能量的稳定态，同时发射出光子，这种化学发光持续而稳定，可达数小时之久。通过 光量子阅读系统记录发光强度，并从标准曲线上计算出待测抗原的浓度。 化学发光项目的免疫学原理· 抗原、抗体特异性结合· 小分子采用(一步、二步)竞争结合法Total T4, Cortisol, T Uptake, Digoxin, Theophylline, Total T3 二步竟争法: FT4, B12, Folate, FT3 大分子采用(一步、二步)夹心法?hCG， hTSH ，Ferritin， Prolactin ，PSA ， CEA， hFSH hLH IgE 一步和二步分析法是怎么回事？ 同步和分步是按照：试剂/样品加入的顺序，孵育的次数(步骤)，清洗分离的次数(步骤)来区分的，像一步分析法是试剂和样品同步加入，进行一次孵育一次清洗。像二步分析法是先加入样品进行孵育和清洗后再加入试剂，进行第二次孵育和清洗。 什么是钩状效应（hook effect），如何判断及解决？ 免疫测定的实质是抗原抗体反应，抗原抗体反应是按一定的分子比例结合，当二者比例适中时，形成的免疫反应最强烈，形成复合物或检测的信号与所测的抗原或抗体成比例关系，但当抗原或抗体其中一者过量时，免疫反应将减弱，测定值呈现假性低值。 在化学发光中像二步分析法一般都能避免钩状效应，对于一步夹心法项目说明书中都提到了产生钩状效应的上限如人绒毛膜促性腺激素的钩状效应值是100万mIU/ml.在实际工作中如遇到测定值与临床严重不符的结果要考虑到钩状效应，解决办法是稀释此样本。磁性微相载体，为抗原提高发光强度、快速达到稳定、持续发光(通常是鼠或羊)，一般来源于暴露于这些动物或接受过动物血清的治疗，分析的干扰：可以在双单克隆夹心法分析模式中引起假阳性，可以在单克隆/多克隆分析模式中出现假阴性。 厂家在试剂生