生化大实验实验聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳.pptVIP

纯度检测：1.SDS测定LDL纯度2.双向免疫扩散测定LDL纯度 含量测定： 1.Folin-酚试剂法测定LDL含量 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析LDL纯度 一、目的要求 1.学习电泳原理和技术 2.学习和掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳（SDS）分离蛋白质技术 电泳概述： 电泳：带电荷的质点，在一定条件的电场作用下，可向一极移动，如带正电荷的质点移向负极，这种现象称为电泳。 影响电泳的主要因素： 1） 电泳介质的pH 2） 缓冲液的离子强度 3） 电场强度 4） 电渗作用 5） 对支持物的选择 6） 温度对电泳的影响 电泳分类： 按原理分：区带电泳、移界电泳、等速电泳、聚焦电泳 二、原理 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂N，N，N?，N?—四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵(APS)或核黄素的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的区带电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 聚丙烯酰胺凝胶有下列特性： (1)在一定浓度时，凝胶透明，有弹性，机械性能好； (2)化学性能稳定，与被分离物不起化学反应，在很多溶剂中不溶； (3)对pH和温度变化较稳定； (4)几乎无吸附和电渗作用，只要Acr纯度高，操作条件一致，则样品分离重复性好； (5)样品不易扩散，且用量少，其灵敏度可