第六章 一般毒性_幻灯.pptVIP

* 二、研究方法 重复剂量毒性试验、亚慢性毒性试验和慢性毒性试验在设计和评价上有许多共同之处，亚慢性毒性试验是长期重复试验中最常用的，以该试验为重点介绍其研究方法。 * 1、实验动物的选择 亚慢性毒性作用研究一般要求选择两种实验动物，一种为啮齿类，另一种为非啮齿类，如大鼠(Wistar, Sprague-Dawley)和狗（Beagle犬），以便全面了解受试物的毒性特征 * 由于亚慢性毒性试验期较长，所以选择被动物的体重(年龄)应较小（离乳不久动物），如小鼠应为15g左右，大鼠100g左右 * 实验动物分四级： 普通动物（Conventional animal,CV）、 清洁动物（Clean animal,CL or Clean conventional animal，CCV） 无特定病原体动物（Specific pathogen free animal,SPF）、 无菌动物（Germ free animal,GF）， 亚慢性毒性试验应使用清洁级以上动物，并在屏障环境内进行试验 * GLP动物实验平台 * 2、染毒途径 亚慢性毒性试验接触外源化学物途径的选择，应考虑两点：1.尽量模拟人类在环境中接触该化合物的途径或方式2.应与预期进行慢性毒性试验的接触途径 相一致 具体接触途径主要有经口、经呼吸道和经皮肤三种 * 亚慢性试验的上限剂量，需控制在实验动物接触受试化合物的整个过程中，不发生死亡或仅有个别动物死亡，但有明显的中毒效应，或靶器官出现典型的损伤。 此剂量的确定可参考两个数值，一是以急性毒性的阈剂量为亚慢性试验的最高剂量；二是以此化合物LD50的1/20?1/5为最高剂量。 3.剂量选择与分组 * 4.观察指标 （1）一般性指标 1）外观体征、行为活动：（时间顺序） 2）动物体重：体重变化的表示方式，可将接触组与对照组同期体重绝对增长的重量或体重百分增长率(以接触化学物开始时动物体重为100%)进行统计和比较 * 3）食物利用率：是指动物每食入100g饲料所增长的体重克数。分析比较接触组与对照组食物利用率，有助于分析受试化学物对实验动物的生物学效应 4）症状 实验动物在接触外来化合物过程中所出现的中毒症状及出现各症状的先后次序、时间均应记录和分析 * 血液学指标：包括红细胞计数、白细胞计数和分类、血红蛋白定量、血小板等 血液生化指标：AST、ALT、ALP（碱性磷酸酶）、BUN、TP、ALB、GLU、T-BIL（胆红素）、Crea、T-CHO 一般为筛检性和探讨性 （2）实验室检查： * 亚慢毒性试验中应重视病理学检查。凡是在染毒过程中死亡的动物均应及时解剖，肉眼检查后再进行病理组织学检查。必要时作组织化学或电镜镜检 (3) 系统尸检和病理学检查 * 1）脏器系数 (称脏/体比值)：是指某个脏器的湿重与单位体重的比值，通常以100g体重计。如肝/体比 即 (全肝湿重/体重)?100 此指标的意义是实验动物在不同年龄期，其各脏器与体重之间重量比值有一定规律 若受试化学物使某个脏器受到损害，则此比值就会发生改变，可以增大或缩小，如增生、充血、水肿、萎缩等变化。 * 因此，脏/体比值是一个灵敏、有效和经济的指标 2）病理学检查：组织病理学检查是亚慢性毒性试验中最重要的检测指标之一。可确定化学物对机体毒作用的靶部位、损害的性质和程度。 （4）其它检查：生物标志物 * 三、慢性毒性作用（chronic toxicity) 慢性毒性：是指实验动物或人长期（甚至终生）反复接触外源化学物所产生的毒性效应 * 慢性毒性试验的试验期限，应依受试物的具体要求和实验动物的物种而定 如用大鼠试验期限可为1年，用狗则试验期限可1～2年 慢性毒性试验应终生接触受试物 如果慢性毒性试验与致癌试验结合进行，则实验动物染毒时间最好接近或等于动物的预期寿命 * （三）慢性毒性试验方法要点 1、实验动物的选择 慢性毒性试验选择实验动物的条件与亚慢性毒性试验相同。但实验动物最好为纯系甚至同窝动物均匀分布于各剂量组 * 实验动物年龄应较小，大鼠和小鼠应为初断奶者，即小鼠出生后3周，体重10?12g；大鼠出生后3?4周，体重50?70g。性别要雌雄各半 * 2.慢性毒性试验期限 一般认为工业毒理学慢性试验动物染毒6个月或更长时间 环境毒理学与食品毒理学则要求实验动物染毒1年以上或2年 也有学者主张动物终生接触外源化学物才能全面反映外源化学物的慢性毒性效应，以及求出阈剂量或无作用剂量 * 慢性毒性试验多为经口与经呼吸道接触 染毒途径 经呼吸道接触，每日接触时间，依试验要求而定 工业毒物的试验通常每日吸入4～6小时 环境污染物一般要求每日吸入8小时或更长 * 3.剂量的选择与分组 一般设3个染毒剂量组和1个对