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- 2016-12-08 发布于湖北
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剪切 拼接 导入 表达 (一)获得目的基因 (二)形成重组DNA分子 (三)将重组DNA分子导入受体细胞 (四)筛选含有目的基因的受体细胞 (五)目的基因的表达 四、基因工程的基本操作步骤 步骤一 获得目的基因 人工合成 利用PCR技术扩增 已知序列: 从基因文库获得 未知序列: ( DNA library ) 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction) 化学合成 基因工程的基本操作程序 1、获得目的基因 2、形成重组DNA分子 3、将重组DNA分子导入受体细胞 4、筛选含有目的基因的受体细胞 5、目的基因的表达 剪切 拼接 导入 筛选 表达 目前被较广泛提取使用的目的基因有:苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。 基因操作的基本步骤 一、提取目的基因—— 将需要的基因从供体生物 的细胞内提取出来。 供体生物细胞 取出DNA 用限制酶剪去多余部分 目的基因 限制酶 目的基因的序列未知 1、从基因文库中获取 目的基因的序列已知 2、利用聚合酶链式反应(PCR)技术扩增 3、人工合成 获取目的基因的常用方法: 1、基因文库的构建——直接分离法(或鸟枪法) 该法最大的缺点是带有很大的盲目性,工作量大,成功率低。且不能将真核生物的基因转移到原核生物中去。 2、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应,
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