第四章 发酵机制及控制.ppt

（3）通风量过大，溶氧水平高。使得菌体耗糖速度降低。（能荷的问题） （4）种子不良，种子衰老；接种温度过高，导致菌体被烫死。 （5）前期通风较少，pH值偏低，代谢产物积累较多的酸性物质，不利于菌体的生长。 4、中后期，OD值继续升高，好糖快，但是产酸很低 危害： 生生产上说的：只长菌、不产酸 产生原因： （1）生物素浓度过高 （2）可能是感染了杂菌 镜检初步判断是否感染了杂菌 5、发酵中后期pH值低，耗糖快，但是产酸低或者不产酸 （1）可能是感染了杂菌，上述情况。 （2）供氧不足，导致酸性产物的积累 （3）生物素浓度过高、磷酸盐浓度过高，导致OD值增长太快，这些都是菌体大量增殖的有利条件。 处理方法： 大量的通风、提前流加尿素，迅速提升发酵液的pH值。 6、发酵过程中发酵液泡沫太多 危害：…… （1）淀粉质量差、杂质多，蛋白质含量高 （2）糖化不完全，糖化液中含有糊精 （3）糖化工艺不合理，复合物形成过多 （4）可能是感染杂菌 （5）泡敌选择不理想 在柠檬酸发酵过程中，存在三个控制要点： （1）点：EMP畅通无阻 控制Mn2+ NH4+浓度升高，解除柠檬酸对PFK的抑制；防止侧系呼吸链失活 。 （2）点：通过CO2固定反应生成C4二羧酸，强化这一反应的方法和意义？………… （生物素、锰离子、镁离子、罐压等） （3）点：柠檬酸后述的酶的酶活性丧失或很低： 方法：控制培养基中的Fe2+ 的浓度 五、柠檬酸产生菌的育种 1.透明圈大的菌株 平板：10%甘薯 + 2 %的琼脂 + 0.5% CaCO3 诱变后，涂布，透明圈大的则好，为何？淀粉的水解能力。 2.显色圈大小 平板：麦汁培养基 + pH值指示剂 诱变后，33℃培养3天，显色圈大的则好。 3.不分解柠檬酸的菌株 不利用柠檬酸为碳源进行生长的菌株，说明其TCA循环中柠檬酸后述的酶的活性较低，或者丧失，这有利于柠檬酸的积累。 方法：以柠檬酸为唯一的碳源的培养基上，选择生长不好的突变株。 4.选育不长孢子、少长孢子、迟长孢子的菌株 在培养基中如果菌株能够大量合成积累柠檬酸，自然会使TCA循环中的中间产物浓度降低，这样不利于孢子的形成 。 §4-4 GA的生物合成机制与代谢调节 一、GA 的生物合成途径 二、GA生物合成的内在因素 三、GA 生物合成的最理想途径与转化率 四、生物素在GA发酵中的作用 五、细胞膜通透性的调节 六、GA发酵的外在因素 七、GA发酵生产中的异常现象及其处理 一、GA 的生物合成途径 （1）EMP:丙酮酸，ATP,NADH （2）HMP:6－磷酸果糖 3－磷酸甘油酸 NADPH:?－酮戊二酸还原氨基化必需的供氢体。 （3）TCA循环:生成谷氨酸前体物质?－酮戊二酸。 （4）CO2固定反应:补充草酰乙酸。 （5）乙醛酸循环:使琥铂酸、延胡索酸和苹果酸的量得到补充，维持TCA循环的正常运转。 谷氨酸脱氢酶 （6）还原氨基化反应:?－酮戊二酸─────→ 谷氨酸 葡萄糖 中间产物 a－酮戊二酸 谷 氨 酸 谷氨酸脱氢酶 NH4＋ 抑 制 谷氨酸的生物合成模式 二、GA生物合成的内在因素--产生菌的生化特点 1、α—KGA脱氢酶酶活性微弱或丧失 2、GA产生菌体内的NADPH的在氧化能力欠缺或丧失 3、产生菌体内必须有乙醛酸循环（DCA）的关键酶——异柠檬酸裂解酶。 4、菌体有强烈的L—谷氨酸脱氢酶活性 α-KGA + NH4+ +NADPH → GA + NADP 反应机制如下： 异柠檬酸 α—KGA NADPH NADP α—KGA GA 三、GA 生物合成的最理想途径与转化率 1、在前述GA 合成所必需的条件的基础上（……，封闭乙醛酸循环）体系不存在CO2固定反应，则有： 则有： 3/2 C6H12O6 + NH4+ → C5H9O4 + 4 CO2 （来自何方？） 产率：147 /（180*3/2）= 54.4% 3/2Glucose 丙酮酸 丙酮酸 丙酮酸 + + + + 乙酰辅酶A 乙酰辅酶A CO2 乙酰辅酶A 柠檬酸（DCA循环封闭） 谷氨酸 2、在前述GA 合成所必需的条件的基础上（封闭乙醛酸循环），存在CO2固定反应， 则有： C6H12O6 + NH4+ →C5H9O4 + CO2