对抗生素抗性与耐药性关系综述.docVIP

对抗生素抗性与耐药性关系综述 ; 实验方法; 取该菌液1mL入灭菌平皿中,将融化的MH固体培养基(牛肉膏6.25g/L;酪蛋白胨17.5g/L;可溶性淀粉1.5g/L;琼脂1.3%;pH7.2±0.2,)约20mL倒入平皿,混匀。待培养基凝固后,室温放置3~5min,用镊子将药敏纸片贴放在平皿上,轻压使紧贴琼脂表面,静置5min,置于37℃培养箱内,恒温培养16~18h。量取抑菌圈直径,并记录结果。以标准敏感菌株大肠杆菌ATCC25922为质控菌,操作同上。受试菌株对多种抗生素的敏感性参照国际现行的临床实验室标准化协会CLSI制定的《抗菌药物敏感性实验执行标准》第十九版信息增刊提供的纸片法标准进行判定(见表2)[10]。质粒提取及检测取培养过夜的菌液10mL于离心管中,10000r/min离心5min,弃去上清,向沉淀中加入10mg/mL溶菌酶(以pH8.0,10mmol/L的Tris-HCl配制)500μL,摇匀,37℃水浴45min。采用质粒提取试剂盒,对待测菌株质粒进行提取,并进行1%的琼脂糖凝胶电泳,以λHindⅢ为标准分子量Marker。质粒消除SDS法将待测菌株以2%的接种量接至含有不同浓度SDS的灭菌MRS培养基中(SDS浓度分别为0.05%、0.1%、0.15%、0.2%、0.25%)[11],37℃恒温培养12代,每代24h,以质粒消除前菌株为对照,分别进