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微生物学实验 生物技术系 陈 敏 土壤微生物的分离纯化及菌落观察 目的要求 基本原理 实验器材 操作步骤 目的要求 基本原理 实验器材 样品：菜园土壤 培养基： 高氏Ⅰ号培养基；牛肉膏蛋白胨培养基；马丁氏琼脂培养基 无菌水： 盛9ml无菌水的试管；盛90ml无菌水并带有玻璃珠的三角烧瓶等 仪器或者其他用具：无菌玻璃涂棒、移液枪、无菌培养皿等 基本操作（稀释涂布法） 四大类微生物菌落特征比较 基本操作（划线分离法） 点燃酒精灯。右手持接种环，在火焰上灼烧灭菌。 试管口靠近火焰旁，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼3s左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。 接种环轻轻接触菌苔，取出少许。注意接种环抽出时不要碰到管壁和管口。 迅速将接种环伸入另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面表面积，同时不要将培养基划破。 烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时不要移动试管，以免在移动中纳入可能含菌的空气。 将接种针在火焰上烧灼灭菌后放回原处。 * 1、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化微生物的基本操作技术 2、了解四大类微生物的菌落特征 3、熟练掌握微生物无菌操作技术 从混杂的微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物的分离与纯化。本实验采用平板分离法，其基本原理主要包括两个方面： （一）选择性培养基：投其所好，取其所抗。 （二）通过稀释涂布平板法或平板划线法获得单菌落。??? 稀释涂布平板法 超净工作台 倒平板：将培养基加热溶化，待冷至55～60℃后分别倒平板，每种培养基倒三皿 制备土壤稀释液：称取土样10g，放入盛有90ml无菌水的三角瓶内，振摇约20min，使细胞分散。用10倍稀释法将土壤溶液稀释至10-6 涂布：用无菌吸管分别从不同土壤稀释液中吸取0.1ml对号放入平板，用无菌涂布棒涂布到整个平板表面，静置5～10min，使菌液吸附进培养基 培养：放线菌、霉菌培养基平板倒置于28℃温箱中培养3～5d；细菌平板倒置于37℃温箱中培养1～2d 倒平板 sample 制备土壤稀释液 菌落观察 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据 气 味 菌落正反面颜色的差别 菌落颜色 与培养基结合程度 透明度 外观形态 含水状态 霉 菌 放线菌 酵母菌 细 菌 菌落特征 划线分离纯化：将平板上长出的单个菌落分别挑取少许细胞划线分离，分别置28℃或37℃温箱培养 挑取单菌落：将上述培养后长出的单菌落分别挑取少许接种到斜面培养基上，置28℃或37℃温箱培养直至大量菌苔长出 纯培养的确定：1）观察菌落特征是否一致；2）显微镜检测个体形态是否为单一的微生物类群 基本操作（斜面接种法） *
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