制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法总结.doc

Inoue法制备感受态大肠杆菌总结 培养基的准备 SOB培养基： 100ml 胰化蛋白胨 2 g 酵母提取物 0.5 g NaCl 0.05 g 250mM KCl 1 ml 高压灭菌 使用前加 2mol/L MgCl2 0.5 ml SOB琼脂板（含20mmol/L MgSO4 和20mmol/L 氨苄） 100ml 胰化蛋白胨 2 g 酵母提取物 0.5 g NaCl 0.05 g 琼脂 1.5 g 250mM KCl 1 ml 高压灭菌 50℃温浴 再加 2mol/L MgSO4 1 ml 2mol/L MgCl2 0.5 ml 20mg/ml 氨苄 100 ul 混均倒平板（90mm2） SOC培养液 50ml 胰化蛋白胨 1 g 酵母提取物 0.25 g NaCl 0.025 g 250mM KCl 0.5 ml 2mol/L MgCl2 0.25 ml 1mol/L 葡萄糖(0.22um过滤除菌) 1 ml INOUE转化缓冲液的准备：(250ml) MnCL2.4H2O 2.72g CaCL2.2H2O 0.55g 定容到250ml KCL 4.6625g PIPES(0.5mol/L,PH6.7) 5 ml 45μm孔径滤膜过滤，分50ml每份—20℃保存 挑取一个经37℃培养19h平皿上的单菌落（2~3mm直径），接种至250ml 锥形瓶中的25ml SOB培养液中，37℃摇床（250~300r/min）