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第二次实验 一、基础及常用培养基的种类（示教） 二、细菌代谢产物的检查（示教） 三、消毒与灭菌（操作） 四、补体溶血反应（示教） 一、基础培养基的制备 肉汤培养基：牛肉去筋膜后切碎→称取牛肉500克加水1000ml，放冰箱一晚→次日取出煮沸，半小时后过滤→加入蛋白胨1%、氯化钠0.5%、硫酸氢二钾0.1% →校正PH7.4-7.6 →过滤→分装，灭菌 加入2%~3%琼脂——固体培养基 0.3%~0.5%琼脂——半固体培养基 普通琼脂培养基冷至56℃左右加入5%~10%脱纤维的无菌血液→血琼脂培养基 一、基础及常用培养基的种类 二、细菌代谢产物的检查—鉴别细菌 1、糖发酵试验：原理—某些细菌可分解糖 材料：单糖管+倒置小试管； 1%各种糖加入无糖蛋白胨水培养基 指示剂：溴甲酚紫（碱性：不变色；酸性：黄色） 记录：⊕表示产酸产气； +表示产酸不产气 -表示不发酵 糖分解试验 糖发酵试验结果记录 原理：某些细菌分解色氨酸—H2S+醋酸铅 ——硫化铅（黑色） H2S试验 3、细菌的色素 三、消毒与灭菌 高压蒸汽灭菌法★ ★ 使用标准：103.4kPa(1.05kg/cm2） 121.3℃维持15-20分钟 效果:可杀灭包括细菌芽胞在内的所有微生物 适用范围：一般培养基、生理盐水、手术器械、注射器、手术敷料等耐高温耐潮湿物品 步骤： 3）取剩余大肠杆菌、枯草杆菌接种管各一支作为试验组，放入100℃沸水中加热5分钟，然后取出。 4）将试验组与对照组共4支管均放入37 ℃恒温箱，孵育24小时后，观察各管有无细菌生长，从实验结果中比较不产生芽孢的大肠杆菌与产芽孢的枯草杆菌对热的抵抗能力。 四、补体溶血反应 原理:补体经典激活途径 （抗原） （抗体） （激活） 绵羊红细胞+溶血素→IC →→补体 材料 溶血素(绵羊红细胞抗体) 补体(新鲜的豚鼠血清) 生理盐水 2％绵羊红细胞 小试管、1ml吸管、37℃水浴箱等 方法:取小试管4支，按下表加入各物 结果判断 若红细胞溶解，则液体呈红色透明，为溶血反应阳性，以“十”表示； 若红细胞不溶解，则液体仍呈匀混浊或有少量红细胞沉于管底，为溶血反应阴性，以“一”表示。 结果分析 * * 供营养要求较高的细 菌生长、观察溶血情况 血液琼脂培养基 供保存菌种和观察细菌动力 半固体培养基 供细菌分离、纯化、鉴定、计数等 普通琼脂培养基 供增菌及其他培养基基础 液体培养基 用途 培养基种类 细菌在液体培养基中的生长情况 菌膜 菌沉淀 均匀浑浊 对照 细菌在半固体培养基中的生长情况 1、3：有动力 2：无动力 对照管 GLU 大肠杆菌 乳糖 大肠杆菌 乳糖伤寒杆菌 GLU 伤寒杆菌 伤寒杆菌 大肠杆菌 意义 葡萄糖 乳糖 糖类 菌种 变形杆菌 大肠杆菌 意义 结果 菌种 2、硫化氢试验 变形 杆菌 大肠 杆菌 绿脓杆菌 金黄色葡萄球菌 意义 色素 菌种 干热灭菌器 高压蒸汽灭菌器 适应范围 灭菌温度、时间 种类 1、常用热力灭菌器 干烤：160-170经2h。适用于玻璃器皿、瓷器、某些粉剂药品等灭菌。 干热灭菌器 2、紫外线杀菌试验 结果： 分析： 3、湿热灭菌（操作） 细菌对热的抵抗力： 材料：大肠杆菌肉汤培养物、枯草杆菌肉汤培养物、小管肉汤、温度计、烧杯、三脚铁架、酒精灯 步骤：1）取4支肉汤管分为两组，两支用吸管各加一滴大肠杆菌；另外两支各加一滴枯草杆菌；以标签标记。 2）取大肠杆菌、枯草杆菌接种管各1支，不加热处理，作为对照组，并作好标记。 枯草杆菌（有芽胞） 大肠杆菌（无芽胞） 方法及结果 细菌 0.75 - - 0.25 4 0.25 0.25 0.25 0.25 3 0.5 0.25 - 0.25 2 0.5 - 0.25 0.25 1 N.S(ml) 补体(ml) 溶血素(m1) 2％绵羊RBC(m1) 管号