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生物化学实验 生物化学课程组 实验室守则 一、安全卫生 所有进入实验室的人员都有监督实验室安全、卫生、仪器操作和维护的义务。 在测定完成后，使用者须做好实验室的清洁工作，将公用物品归还原位, 立即将所使用过的试验台、实验用品等清洗干净，清除垃圾，并及时归还所借物品。 实验室安全卫生实行值日生制，值日生在每天使用完实验室后进行检查，必须保持实验室内环境整洁，走道畅通，设备器材摆放整齐。 禁止在实验室吸烟、吃东西、乱抛纸屑杂物。 最后一个离开实验室的人一定要关好水、电、门和窗。 二、仪器使用 严禁在实验台的插孔上使用功率大的电器。 对于功率大的电器，如烘箱、马福炉等，请严格按照要求操作，每天应在晚上十点前关闭。 烘箱是不锈钢体的，不能将未洗干净的物品放进烘箱。不能用不干净的抹布擦烘箱。 使用离心机，离心管一定要称重平衡后，对称放置。 天平，特别是万分之一的天平不得任意搬动。使用完毕后应立即清扫天平，以免化学试剂腐蚀天平。 不能用实验室的分样器、加样枪加强酸或强碱，以免腐蚀。 气瓶内气体不能用尽，必须留有剩余压力(如氧气不少于2 Kg/m2)。 有毒或有腐蚀性气体的实验必须在通风橱内进行。 实验后的废渣、废液，要倒在废渣箱和废液缸中，不准随便倾倒或倒入水池中。 超净台使用注意事项：保持干净，紫外灯的使用时需遮盖前面板。 冰箱：不得放危险品，或相邻能起化学反应的药品。 三、实验数据及其处理 所有实验室存储的样品、试剂必须如实写好标签，如样品应有样品名称、存放时间、存放人。配制的试剂应有试剂名称、浓度、配制时间和配制人等。 必须进行至少三次平行实验，以求得标准偏差。数据图须标有误差棒。 实验中，必须如实地记录各种实验数据。实验后，二星期内完成实验结果整理，正确处理实验数据，不得更改原始数据。 实验一 糖类的定量测定  生物化学课程组 一、实验目的 香菇，又称香蕈、冬菇，是一种生长在木材上的真菌类，它含有大量的氨基酸等对人体有益的营养物质，还含有很多的多糖。香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫 功能和刺激干扰素形成等功能。本实验学习水溶性糖类的定量测定方法。 二、实验原理 香菇的可溶性糖主要是指能溶于水及乙醇的单糖和寡聚糖。苯酚硫酸法测定可溶性糖的原理是：糖在浓硫酸作用下，脱水生成的糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚缩合成一种橙红色化合物，在10－100mg/l范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，故可用比色法在此波长下测定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高，实验时基本不受蛋白质存在的影响，并且产生的颜色稳定160min以上。 三、实验仪器及试剂 1．仪器：分光光度计、电炉、铝锅、20mL刻度试管、刻度吸管、记号笔、吸水纸适量。 2．试剂： （1）2g/L蒽酮试剂：称取2g蒽酮（AR）溶于1000ml的浓硫酸中，当日配置使用。 （2）1％葡萄糖标准液：将分析纯葡萄糖在80℃下烘至恒重，精确称取1.000g。加少量水溶解，移入100mL容量瓶中，加入0.5mL浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。 （3）100ug/ml糖标准液：精确吸取1％葡萄糖标准液1mL加入100mL容量瓶中，加水定容。 四、实验步骤 1．标准曲线的制作： 取20mL刻度试管11支，从0－10分别编号，按表27－1加入溶液和水，加标准糖液0.0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.20、1.60，用水补足至2ml.然后向试管内加入8.00mL 蒽酮试剂，摇匀后迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖以防蒸发。自沸水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。 2．可溶性糖的提取： 取干或新鲜香菇子实体，擦净表面污物，剪碎混匀，称取1.0g，用80-90℃热水30ml，在80-90℃恒温水浴锅中提取30分钟，4000 rpm离心10分钟。收集上清，沉淀重复提取一次，合并两次上清，用循环水真空泵抽滤除去漂浮物。吸取滤液1.0ml稀释至100 ml，得待测样液。 3．测定：吸取2.0mL样品液于试管中（重复2次），向试管内加入8.00mL 蒽酮试剂，摇匀后迅速浸入冰水浴中冷却，各管加完后一起浸入沸水浴中，管口加盖以防蒸发。自沸水浴重新煮沸起，准确煮沸10分钟取出，用自来水冷却，室温放置10分钟左右，于620nm比色。由标准线性方程求出糖的量，按下式计算测试样品中糖含量。 糖的含量＝（C×n×V）/（α×W） 式中：C一标准方程求得糖量（ug）；α一吸取样品液体积（mL）；V－提取液量（mL）；n一稀释倍数；W一（g） 五、思考题 1、简述苯酚法与蒽酮法测定可溶性糖的基本原理。