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当底物浓度高达一定程度 反应速度不再增加，达到最大速度；反应为零级反应。 [S] V0 Vmax * 中间产物 酶促反应模式——中间产物学说 米-曼氏方程式 E + S k1 k-1 k2 ES E + P k-2 1913年Michaelis和Menten提出反应速度与底物浓度关系的数学方程式，即米－曼氏方程式，简称米氏方程式。 V0 Vmax[S] Km + [S] ＝ ─── [S]：底物浓度 V0：不同[S]时的反应初速度 Vmax：最大反应速度 (maximum velocity) Km：米氏常数 (Michaelis constant) * 米氏方程式推导基于两个假设： E与S形成ES复合物的反应是快速平衡反应，而ES分解为E及P的反应为慢反应，反应速度取决于慢反应即 V0＝k2[ES] (1) S的总浓度远远大于E的总浓度，因此在反应的初始阶段，S的浓度可认为不变即[S]＝[St]。 E + S k1 k-1 k2 ES E + P 反应早期产物的浓度[P]忽略不计，总反应简化为： * 稳态：ES的生成速度与分解速度相等，即 [ES]恒定 k1 ([Et]－[ES]) [S]＝k-1 [ES] + k2 [ES] k-1 + k2 ＝ Km （米氏常数） k1 令： 则(2)变为: ([Et]－[ES]) [S] ＝Km [ES] (2) ＝ ([Et]－[ES])[S] k-1+k2 [ES] k1 整理得： 推导过程 * 当底物浓度很高，将酶的活性中心全部饱和时，即[Et]＝[ES]，反应达最大速度 Vmax＝k2[ES]＝k2[Et] (5) [ES]＝────── [Et][S] Km + [S] (3) 整理得: 将(5)代入(4)得米氏方程式： Vmax[S] Km + [S] V0＝────── 将(3)代入(1) 得: k2[Et][S] Km + [S] (4) V0＝─────── * 当反应速度为最大反应速度一半时 Km＝[S] ∴Km值等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度，单位是mol/L。 2 ＝ Km + [S] Vmax Vmax[S] Km值的推导 * Km值：等于酶促反应速度为最大反应速度一半时的底物浓度。 Km是酶的特征性常数之一： 在酶的结构、溶液pH、温度等条件不变的情 况下，酶促反应底物的Km不因反应中酶浓度的改变而不同。 同一酶对于不同底物有不同的Km值，不同酶对同一底物也有其各自的Km 。 Km只与酶和底物的种类以及反应环境（ pH、温度、离子强度）有关，而与酶浓度无关。 Km的范围多在10-6～10-2mol/L之间。 Km的意义 * 6.0 ? 10?3 己-N-乙酰2葡萄糖胺 溶菌酶 2.5 ? 10?2 H2O2 过氧化氢酶 4.0 ? 10?3 D-乳糖 ?-半乳糖苷酶 2.5 ? 10?3 N-苯甲酰酪氨酰胺 1.08 ? 10?1 甘氨酰酪氨酰甘氨酸 胰凝乳蛋白酶 2.6 ? 10?2 HCO3? 碳酸酐酶 1.5 ? 10?3 D-果糖 5 ? 10?5 D-葡萄糖 4 ? 10?4 ATP 己糖激酶（脑） Km（mol/L） 底物 酶 一些酶的底物的Km * Km可近似表示酶对底物的亲和力 * 当k2 k-1时，Km ? k-1/k1。即相当于ES分解为E + S 的解离常数（dissociation constant, Ks）。此时，Km代表酶对底物的亲和力。 Km越大，表示酶对底物的亲和力越小； Km越小，表示酶对底物的亲和力越大。 k-1 + k2 Km＝ k1 kcat = Vmax /[Et] kcat表示酶被底物完全饱和时，单位时间内每个酶分子（或活性中心）催化底物转变成产物的分子数。 kcat也称为酶的转换数(turnover number)，单位是s?1 。可用来比较每单位酶的催化能力。 多数酶的转换数在1?104 s?1之间 kcat代表酶的转换数 * 酶 底 物 转换数 （s?1） 过氧化氢酶 H2O2 40 000 000 碳酸酐酶 HCO3? 400 000 乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱 14 000 ?-内酰胺酶 苄青霉素 2 000 延胡索酸酶 延胡索酸 800 Rec A蛋白 ATP 0.4 一些酶的转换数 * 当[S] Km时 kcat/Km是此二级反应的速率常数，也称特异性常数，其单位是L·mol?1· S?1 。 反应速率的大小取决于E和S由于相互渗透而相互碰撞的速率。.这种被