Ⅲ-Enzyme-Production课件.pptVIP

* 二. 细胞生长动力学细胞生长速度与外界环境影响的规律 莫诺德方程： 在培养过程中，细胞生长速率与细胞浓度成正比。 rx为细胞生长速率； x 为细胞浓度； μ为比生长速率 当培养物中只有一种限制性基质，而不存在其他限制性因素时， μ为此限制性基质浓度的函数。 s限制性底物浓度； μm最大比生长速率，即限制性底物过量时μ * 连续全混流反应器的发酵过程中，不断流加培养液并不断地排出同体积发酵液。在稳态时，游离细胞连续发酵的生长动力学方程为： D 为稀释率，是单位时间内，流加培养液与发酵容器中发酵液体积之比。单位为h-1。 * D(稀释率)取值的特点: D=0,分批发酵 D=m dX/dt为零，连续发酵能持续进行。 Dm dX/dt为正值，发酵液中细胞浓度X↑，限制性基质浓度S↓, m↓直至达到D=m，重新达到平衡 Dm dX/dt为负值，发酵液中细胞浓度X ↓ ，限制性基质浓度S 相对↑ , m ↑直至达到D=m，重新达到平衡 Dmm 细胞浓度趋向于零，无法达到新的平衡 * 三、产酶动力学: 宏观产酶动力学：与细胞比生长速率、细胞浓度、细胞产酶模式有关。一般产酶动力学方程可表达为： dE/dt=(?μ+ ?)x x — 细胞浓度（gDWcell/L)，每升发酵液所含的干细胞重量。 μ— 细胞比生长速率（h-1) ? — 生长偶联的比产酶系数（U/gDWcell) ? — 非生长偶联的比产酶系数（ h-1 U/gDcell) * 根据细胞的产酶模式不同，产酶速率与细胞生长动力学关系也有所不同。 1.同步合成型的酶。 产酶与细胞生长相关联,平衡期产酶量为零，非生长偶联比产酶速率 ?=0 产酶动力学方程： dE/dt=?μx dE/dt=(?μ+ ?)x dE/dt=(?μ+ ?)x * 中期合成型：特殊的生长偶联型，动力学模型与同步合成型一样： dE/dt=?μx 有阻遏物时： ?=0 解除阻遏物时，才开始酶的合成 比较 * 延续合成型：在细胞生长期和平衡期都能合成酶，是部分偶联型： dE/dt=(?μ+ ?)x * 滞后合成型：为非生长偶联型，生长偶联的比产酶系数?=0 dE/dt= ?x 是一条直线。 * 模型中参数的确定 做实验，得出产酶的数据，生物量的数据，然后，线性化处理（数据回归） 模型作用：指导生产，放大生产规模。 * 2.5 固定化微生物细胞发酵产酶 固定化细胞又称固定化活细胞或固定化增殖细胞，是各种方法固定在载体上又能进行生长、繁殖和新陈代谢的细胞。 * 一.固定化细胞生长和产酶动力学 细胞量包括两部分，一部分固定在载体上，一部分泄露在培养液中。 固定化细胞生长动力学方程可表达为： dx/dt= μmgSXg/(Ksg+S)+ μmfSXf/(Ksf+S) μmg和μmf分别代表固定在载体上细胞和游离细胞的最大比生长速率。 Ksg和Ksf为莫诺德常数。 产酶动力学不要求掌握。 * 二. 固定化细胞产酶的特点 1.提高产酶率。 细胞固定化后，细胞在一定的空间范围内生长繁殖，细胞密度大，产酶率高。 例：固定化枯草杆菌生产a- 淀粉酶，在分批发酵时，每升发酵液每小时产酶 1031U，连续发酵可达 4875U，而游离细胞发酵只能产酶 844U 又如根酶发酵产脂肪酶，游离的只能产酶22U，而固定化能达到 176U. 2.可以反复使用或连续，而且高稀释率条件下发酵生产。 固定化细胞固定在载体上，不容易脱落流失，可以连续，多次使用. 也可以在高稀释率的条件连续发酵较长时间.例如：固定化细胞乙醇厌氧发酵可以连续使用半年以上． * 3.发酵稳定性好。 细胞固定化后，由于受到载体的保护，细胞对环境的适应力增强，能够比较稳定的进行发酵生产． 4.缩短发酵周期，提高设备利用率。 固定化细胞预培养，生长好后转入发酵培养基发酵生产，很快就能发酵产酶，而且只要不断的供给新鲜培养基，能够较长时间的维持其产酶特性． 5.产品容易分离纯化。 6.适用于胞外酶等胞外产物的生产。 7.基因工程菌的质粒稳定，不易丢失。 * 三. 固定化细胞发酵产酶的工艺条件控制 1.固定化细胞的预培养（培养条件） 2.溶解氧的供给 由于载体的影响，氧的溶解和传递受到阻碍，尤其是包埋法固定的细胞。必须增加溶解氧的量（加大通气量） 3.温度的控制 连续发酵，培养基预调温。 * 2.6 动植物细胞发酵产酶 一. 动植物细胞的培养特性比较 微生物 植物细胞 动物细胞 细胞大小（ μm） 1—10 20—300 10—100 倍增时间（h） 0.3—6 12